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鸡白痢沙门氏菌病是由鸡白痢沙门氏菌感染引起的一种急性传染病,给家禽养殖业带来严重的经济损失。并且由于抗生素的滥用,导致了大量鸡白痢沙门氏菌耐药菌株的出现。中草药作为替抗的重要药物,被广泛应用于畜禽的疾病治疗。因此本试验通过对鸡白痢沙门氏菌病感染模型的研究,建立了鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型,通过对模型病雏鸡的临床症状观察,中兽医辨证分型,确立治则,开展验方筛选试验,并对其机制进行初步的探究,以期为寻找有效防治雏鸡白痢病的新中兽药提供试验数据及理论基础。试验一采用鸡白痢沙门氏菌C79-3菌株分别以尿囊腔染毒途径、气室染毒途径和蛋壳接触染毒途径感染11日龄、14日龄、18日龄3种不同日龄的SPF鸡胚,并在每个日龄设置3种（100CFU、300 CFU和900 CFU）感染剂量,对建立鸡白痢沙门氏菌病鸡胚感染模型的方法开展研究,观察感染后鸡胚的死亡率、出壳率和出壳后雏鸡的临床症状和病死率。初筛结果显示:以尿囊腔染毒途径感染1 1日龄和14日龄的鸡胚全部死亡,感染的18日龄鸡胚全部孵出,但雏鸡未出现鸡白痢症状;而以气室染毒途径和蛋壳接触染毒途径2种方式感染的鸡胚未见死亡,且出壳率均达65%以上;其中,气室染毒途径感染的鸡胚,出壳的雏鸡在7 d的观察期内均呈现持续性排灰白色稀粪的腹泻症状以及部分病死现象。而蛋壳感染只有14日龄鸡胚感染组出壳雏鸡有持续性的腹泻。根据初筛结果开展进一步的造模筛选试验。将90枚SPF鸡胚分为9组,每组10枚,分别为空白对照组和8个模型组,模型组以11日龄和14日龄鸡胚为试验对象,以气室染毒途径和蛋壳接触染毒途径两种方式感染5种相应浓度的鸡白痢沙门氏菌。结果显示以11日龄鸡胚蛋壳接触染毒途径感染9×105CFU/mL的C79-3菌液和14日龄鸡胚气室染毒途径感染3×103 CFU/mL的C79-3菌液0.1 mL的造模组,出壳后雏鸡可呈现明显鸡白痢病特征,发病率分别为100%和80%,并且鸡白痢沙门氏菌阳性检出率分别达70%和80%。最终确定11日龄鸡胚蛋壳接触染毒途径感染9×105 CFU/mL的C79-3菌液和14日龄鸡胚气室染毒途径感染3×103 CFU/mL的C79-3菌液0.1 mL的方法可建立稳定的鸡胚期感染的鸡白痢沙门氏菌病模型。试验二根据雏鸡白痢沙门氏菌病的临床症状,参照中医小儿泄泻及中兽医瘟病辨证标准,将雏鸡白痢沙门氏菌病辨证为寒湿困脾泄泻病症,其治则为:温阳健脾,祛湿止痢,或理气健脾,燥湿止痢等,拟定具有益气健脾或温中健脾,燥湿止痢或解毒燥湿的3个中药复方进行雏鸡白痢沙门氏菌病的疗效试验。选择经14日龄鸡胚气室感染造模出壳后24 h内呈现典型雏鸡白痢腹泻症状的病雏60只,随机分成4组,每组15只,其中3个组为中药复方治疗组,1个为阳性对照组,另选15只健康雏鸡为空白组。3个中药复方治疗组分别给予中药复方一、二、三的煎液（1 g生药/mL）,连续7 d。通过观察临床症状、腹泻率及死亡率判定疗效。结果显示:以益气温阳,理气燥湿的中药复方一和益气健脾,祛瘀除湿的中药复方三治疗组的总有效率可分别达53.3%和60%,死亡率均为33.3%,显著低于阳性对照组60%的死亡率（P＜0.05）;而以清热燥湿,和血止痢的中药复方二治疗组的总有效率仅为26.7%,相较于阳性对照组雏鸡的13.3%的自愈率,无明显的疗效。治疗试验结果证明以益气温阳,理气燥湿止痢为治则的治疗方药明显优于以清热燥湿为治则的方药,表明雏鸡白痢病症可辨证为寒湿困脾泄泻病症。试验三为了探究复方中药治疗雏鸡白痢的机制,试验采用14日龄鸡胚气室感染造模,将出壳后具有典型鸡白痢腹泻症状的雏鸡75只,随机分成复方中药治疗组、盐酸多西环素组和阳性对照组,每组25只。其中,中药组雏鸡出壳后24 h灌胃方一药液,之后每隔24 h灌胃方三药液,1 mL/只;盐酸多西环素组雏鸡给予盐酸多西环素5 mg/只,1次/d,连续7 d。分别在12 h、36 h、60 h、108 h采集受试鸡的肝脏、盲肠和脾脏,用实时荧光定量PCR的方法测定脾脏和盲肠组织中TLR2、TLR4、TLR15 mRNA的相对表达量;免疫组化法测定脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞的表达量;H E染色法观察肝脏的病变情况;高通量测序法测定盲肠内容物微生物群落。结果显示使用中药治疗后雏鸡脾脏中的TLR2、TLR4、TLR15的表达水平在12～108 h期间呈持续升高的趋势,并且在108 h极显著（P＜0.01）高于其它3组雏鸡的表达水平;盲肠中TLR2、TLR4、TLR15的表达水平在36 h极显著高于其它3组（P＜0.01）;总体为上调脾脏和盲肠中的Toll样受体的表达水平;脾脏CD4+/CD8+的比值在36 h和60 h均极显著（P＜0.01）高于盐酸多西环素组和阳性对照组,分别显著（P＜0.05）和极显著（P＜0.01）高于空白对照组,总体提高了脾脏中CD4+/CD8+的比值,增强了机体的免疫功能;并且与阳性对照组相比显著减少了盲肠微生物中弯曲杆菌属的丰度（复方中药组丰度值:0.0000000,阳性对照组丰度值:0.0000917）（P＜0.01）,降低了盲肠微生物中的致病性。机理分析表明复方中药治疗雏鸡白痢即寒湿困脾泄泻病证的机制与提高免疫,减少盲肠有害微生物的数量,降低其致病风险有关。上述试验结果表明,通过鸡胚气室接种鸡白痢可建立疾病感染模型,并且雏鸡白痢病可辩证为寒湿困脾泄泻证型。益气温阳,健脾燥湿的复方中药可通过提高CD4+/CD8+的比值,改变Toll样受体的表达来增强雏鸡的非特异性免疫,改善盲肠微生物菌群结构降低有害菌的肠致病性,达到治疗雏鸡白痢病的作用。