PIWIL1基因对结肠癌细胞生物学特性的影响

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目的PIWI基因家族是从果蝇卵巢中发现,睾丸中高表达,在干细胞自我更新、精子发生、RNA干扰和翻译调控中扮演重要角色。PIWIL1作为PIWI亚家族的成员之一,与多种肿瘤发生发展相关,但其对肿瘤细胞的影响目前尚未被完全了解。本文以结肠癌细胞系SW620为研究模型,旨在探讨PIWIL1对肿瘤细胞行为学的调控作用。方法本文应用Real-time PCR的方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中表达水平。应用RNA干扰技术抑制PIWIL1在SW620中的表达,研究其对SW620细胞生物学功能的影响。利用Western blot 检测重组表达载体 pSilencer2.1/PIWIL1-shRNA 对 PIWIL1 在蛋白水平的干扰效率。MTT及克隆集落形成实验检测细胞增殖活性。细胞聚集实验检测PIWIL1沉默后对SW620细胞粘附能力的影响。利用细胞划痕实验检测PIWIIL1沉默后SW620细胞的运动能力。侵袭实验检测PIWIL1基因沉默对SW620细胞侵袭性的影响。5-Fu是结肠癌化疗的常用药物,使用MTT法检测PIWIIL1沉默后SW620细胞对5-Fu的敏感性的影响。结果证实了 PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4 在 SW620 细胞中都表达,PIWIL1表达水平最高。构建表达针对PIWBL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,转染之后,用Western blot验证其干扰效率。通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验、细胞划痕及细胞侵袭转移实验分别观察到其对SW620细胞的增殖、运动、侵袭转移能力起到抑制作用,增强了 SW620细胞的粘附能力。通过MTT法检测药物抑制率,结果发现沉默PIWIL1基因的SW620细胞对化疗药物5-FU敏感性明显增高。结论上述结果初步证明了构建的PIWIIL1 shRNA表达载体能明显降低PIWIL1的表达,并抑制结肠癌细胞的增殖活性、运动性、侵袭性。但PIWIL1表达下调增强了 SW620细胞的粘附性及结肠癌细胞对5-FU的敏感性。PIWIL1对结肠癌细胞的生物学功能发挥着重要的调节作用。
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