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猪瘟病毒（Classical swine fevev virus, CSFV）是引起猪的高度传染性疾病猪瘟（Classical swine feve, CSF）的病原，E2和Erns蛋白是其主要的保护性抗原蛋白，也是CSF亚单位标记疫苗研制的主要对象。为了探索利用基因工程方法大量生产CSF主要抗原蛋白的可能性，本试验开展了CSFV Erns和E2蛋白的体外表达研究。利用RT-PCR和nPCR方法从中国兔化弱毒株（C-株）兔脾组织毒中扩增得到Ems/E1/E2基因片段，然后将其克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K上，构建重组质粒pPSWE。经SalI酶线性化后电转化毕赤酵母SMD1168感受态细胞，利用G418抗生素筛选高拷贝重组子。加入0.5%的甲醇诱导表达后，离心收集诱导物上清，硫酸铵沉淀浓缩，透析后的样品进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明 ，Ems/E1/E2在毕赤酵母中得到了表达，表达产物分子量约为89ku，能够与CSFV阳性血清发生特异反应。为了提高E2蛋白的表达水平，将E2基因单独克隆到原核表达载体PGEX4T-1中，构建重组质粒pGST-E2，转入到宿主菌BL21（Star）中，并利用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析的结果显示，E2蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达，表达产物主要以包涵体形式存在。为了提高可溶性蛋白在表达产物中的比例，在较低的温度和IPTG浓度下对重组菌进行了诱导表达。结果表明，当温度降到16℃、IPTG的浓度为0.1mmol/L时，可溶性蛋白的表达量占融合蛋白的40%，经亲和层析纯化后其纯度可达到约85%。