目的:UBE2I是SUMO化修饰过程中的E2连接酶,能转移泛素样蛋白SUMO到目标蛋白上,使目标蛋白发生SUMO化修饰;Nmi是一个可提高IL-2和IFN-γ依赖的转录活性的干扰素诱导蛋白,在IFN-γ刺激下,Nmi能增加STAT1介导的转录活性,继而放大IFN-γ的生物学效应,提示Nmi在IFN-γ信号通路中发挥了重要的作用。实验室前期工作表明,干扰素诱导蛋白Nmi与蛋白质SUMO化E2连接酶UBE2I会发生相互作用,并能改变UBE2I的核定位。本课题研究UBE2I与Nmi相互作用的关键结构,为进一步探讨Nmi与UBE2I的相互作用调控IFN-γ信号通路活性的分子机制奠定基础。方法:1.本课题设计了多个UBE2I截短型和缺失型突变体,插入原核载体p GEX-4T1中进行表达。将构建好的原核表达载体转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,并采用GSH琼脂糖珠亲和层析纯化UBE2I突变体。Nmi采用哺乳动物细胞表达。利用GST-pull down方法研究UBE2I与Nmi相互作用的关键结构;2.采用CO-IP法、免疫组化实验确认UBE2I与Nmi相互作用的关键结构。结果:GST-pull down方法发现UBE2I的62位亮氨酸是UBE2I与Nmi相互作用的关键位点。CO-IP方法证明Nmi不能与缺失62位亮氨酸的UBE2I相互作用。免疫组化实验表明Nmi不能改变缺失62位亮氨酸的UBE2I的核定位。结论:UBE2I的62位亮氨酸是UBE2I与Nmi相互作用的关键氨基酸。