Bad和PCNA在尖锐湿疣组织中的表达及意义

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背景和目的尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染皮肤粘膜引起的良性赘生物,好发于外生殖器、肛周、尿道口、宫颈,偶可见于趾间、口腔、脐窝等部位。近年来CA的发病率呈不断上升趋势,是目前我国很常见的性传播性疾病(sexually transmitte diseases,STD)之一,该病主要发生在性活跃的人群中,多见于青壮年男女。虽然CA是一种良性的增生性疾病,但其具有传染性强,疣体增长迅速,治疗后常易复发等特点,且部分巨大型CA有癌变倾向,致使患者心理压力大,甚至部分患者出现抑郁症状,严重影响患者的身心健康,该病成为国家疾病控制中心(centers for disease control,CDC)重点检测的STD之一。CA皮损生长快,治疗后高复发率,这可能与CA组织中存在异常增殖和凋亡的角质形成细胞有关,但关于CA组织中角质形成细胞异常增殖和异常凋亡的确切机制尚不十分清楚,这种异常增殖和凋亡可能受到多种凋亡相关基因的调控。促凋亡蛋白Bad是Bcl-2家族蛋白中的一员,同时具有BH3同源结构区域和序列,可以促进细胞凋亡。当凋亡刺激信号存在,可导致Bad的结构发生改变,其活化后即转位到线粒体外膜与Bcl-xL结合,从而诱导细胞凋亡。多项研究表明,促凋亡蛋白Bad对多种肿瘤的形成、转移有着重要的意义。PCNA是一种酸性的核蛋白,作为DNA聚合酶的一种辅酶,可以参加细胞异常增殖过程中DNA的复制,而且还与细胞周期的调节密切相关,PCNA是目前公认的肿瘤细胞S期的一种标志物,已被广泛应用于细胞异常增生的实验研究。但促凋亡蛋白Bad在CA组织中的表达情况以及其和PCNA的相关性缺乏研究,为探究CA组织中Bad的表达情况及其与PCNA之间的关系,本实验采用免疫组化的方法检测Bad和PCNA在CA组织和正常包皮组织中的表达情况,探讨Bad和PCNA在CA的发生、发展中的可能病理机制。材料与方法1材料53例CA患者皮损组织标本为实验组,其中男性32例,女性21例;年龄16~65岁,平均32.5士8.7岁;病程14天~180天,平均50.7士4.3天。实验组标本均来自2015年9月至2016年9月郑州大学第一附属医院皮肤与性病科门诊患者。所有入选患者临床表现典型,醋酸白实验阳性,皮损行组织病理检查并符合CA的组织学表现,分子生物学实验证明有HPV感染存在,均与CA的诊断标准相符合,无其他系统性疾病,皮损取材前患者均未接受免疫性的药物、冷冻、激光等任何相关治疗。28例正常对照组标本都来自我院泌尿科成年男性包皮环切术后所切除的包皮组织,并经组织病理检查证明其为正常的组织上皮。2方法采用免疫组化的方法检测Bad和PCNA的表达情况,所有的实验步骤严格按照所用试剂盒上的说明进行操作。Bad阳性表达主要处于细胞膜和细胞质,阳性细胞显色为棕黄色至棕褐色颗粒。PCNA阳性表达定位于细胞核,棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色。参照文献评分标准,根据组织切片中细胞染色强弱及阳性细胞所占总细胞的百分比实行分级评分。染色强度分为不着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色,分别对应着0分、1分、2分、3分。阳性细胞占总细胞的百分比:小于等于10%为0分,在11%和25%之间为1分,在26%和50%之间为2分,在51%和75%之间为3分,大于等于76%为4分。最后将上述两项分值的乘积作为最终得分:得分为0分,判定阴性(-);分值在1分和4分之间,判定为弱阳性(+);5分至8分,判定为阳性(++);9分至12分,判定为强阳性(+++)。3统计学处理将实验所得的数据采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,用χ2检验Bad和PCNA的阳性表达率差异,Bad和PCNA的阳性表达强度应用秩和检验的方法,运用非参系统中的Spearman方法分析CA组织中Bad和PCNA之间的相关性,检验标准P<0.05,差异有统计学意义。结果1 Bad在CA组织和正常包皮组织中的表达53例CA患者组织中,Bad出现阳性表达为37例,其阳性表达率为69.81%(37/53),阳性表达的强度多呈++~+++,阳性显色主要位于细胞膜和细胞质;28例正常包皮组织细胞中Bad出现阳性表达为8例,其阳性表达率为28.57%(8/28),阳性表达的强度多呈-~+。实验组和对照组中Bad的阳性表达率差异有统计学意义(χ2=18.436,P<0.05),Bad在两组中的阳性表达强度有明显的统计学差异(H=23.063,P<0.05)。2 PCNA在CA组织和正常包皮组织中的表达53例CA患者组织中,PCNA出现阳性表达为46例,其阳性率为86.79%(46/53),阳性表达的强度多呈++~+++,阳性颜色主要位于细胞核,大多数呈棕褐色颗粒;28例对照组中PCNA出现阳性表达为11例,其阳性表达率为39.28%,阳性表达强度大多数呈+~++。两组中PCNA的阳性表达率差异有统计学意义(χ2=4.356,P<0.05),PCNA在两组中的阳性表达强度有明显的统计学差异(H=13.452,P<0.05)。3 Bad和PCNA在CA组织中表达的相关性分析在37例Bad表达阳性中,PCNA阳性表达的有31例,6例阴性;在46例PCNA蛋白表达阳性中,Bad出现阳性表达的有31例,阴性15例。经过Spearman相关分析CA组织中Bad与PCNA的阳性表达呈正相关(r=0.379,P<0.05)。结论1.Bad在CA组织中的阳性表达率和阳性表达强度均高于对照组,表明CA组织中存在Bad的过表达,这种过表达提示Bad在一定程度上能促进CA组织中角质形成细胞的凋亡,抑制CA的过度增生。2.PCNA在CA组织中的阳性表达率和阳性表达强度均高于对照组,表明CA组织中存在PCNA的高表达,这种高表达提示CA组织中角质形成细胞存在异常的增殖。3.在CA组织中促凋亡蛋白Bad和增殖细胞核抗原PCNA之间的表达呈正相关,提示Bad和PCNA可能共同参与CA的发生、发展,也提示了CA疾病的形成受到多种凋亡相关基因的调控,但其确切机制仍需进一步研究。
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