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食物过敏作为全球公共健康问题,预防、控制其发生是食品质量与安全把控的首要问题。RBL-2H3细胞具有与肥大细胞相似的生物学特征,细胞表面可表达高亲和力受体FcεRI,是研究食物过敏的一种常见细胞模型。芸香柚皮苷是一种具有抗过敏活性的黄酮类化合物。本文首先采用传统的RBL-2H3细胞脱颗粒模型,探讨芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响及具体作用机制;其次,通过构建OVA激活的RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒免疫模型,探讨芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒的影响及其作用机制,旨在进一步明确芸香柚皮苷的抗过敏活性。芸香柚皮苷对IgE介导的细胞脱颗粒的影响:基于对RBL-2H3细胞活力无影响的芸香柚皮苷浓度,通过ELISA考察芸香柚皮苷对β-Hex、组胺、IL-4和TNF-α释放的影响,并结合AFM对细胞形态考察,证实了芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒有显著抑制作用;通过荧光显微镜考察RBL-2H3细胞内荧光强度,证实了芸香柚皮苷对胞内钙离子增加有显著性抑制作用;通过RT-PCR法考察表面受体FcεRI亚基mRNA的表达,证实了芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞表面受体FcεRI亚基mRNA的表达无显著性影响;通过WB法考察芸香柚皮苷对P-p38/p38、P-JNK/JNK、P-ERK1/2/ERK1/2,P-Iκκα/β/Iκκα/β、P-IκBα/IκBα、P-p65/p65,P-Lyn/Lyn P-Syk/Syk、P-LAT/LAT、P-PLCγ1/PLCγ1蛋白表达的影响,证实了芸香柚皮苷对P-p38/p38、P-J NK/JNK、P-ERK1/2/ERK1/2,P-Iκκα/β/Iκκα/β、P-IκBα/IκBα,P-Syk/Syk、P-LAT/LAT、P-PLCγ1/PLCγ1蛋白的表达有显著性抑制作用。(P<0.05,P<0.01)芸香柚皮苷对sIgE介导的RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒的影响:基于获得的致敏血清含sIgE约为3516 ng/mL,通过流式细胞术考察纯IgE、sIgE与RBL-2H3细胞结合力,通过β-Hex的释放考察细胞脱颗粒程度,通过C CK8考察OVA、致敏血清对RBL-2H3细胞活力的影响,明确RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒免疫模型的建立条件:OVA浓度10 ng/mL,作用时间45 min,致敏血清稀释度1:40,作用时间24 h。随后,通过ELISA、WB考察芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒的影响及其作用机制,结果表明,芸香柚皮苷显著性地抑制了RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒。结论:在IgE介导的RBL-2H3细胞脱颗粒模型中,芸香柚皮苷通过抑制Lyn激酶信号通路中相关蛋白的磷酸化,进而抑制了RBL-2H3细胞胞内钙离子增加,也间接抑制了MAPK和NF-κB信号通路中相关蛋白的磷酸化,最终抑制了RBL-2H3细胞上清中β-Hex、组胺、IL-4和TNF-α的释放,从而明确了其抗过敏活性;在sIgE介导的RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒免疫模型中,芸香柚皮苷通过抑制Syk表达而抑制LAT表达,进而抑制了MAPK和NF-κB信号通路中相关蛋白的表达,最后显著性地抑制了RBL-2H3细胞的高反应性脱颗粒反应,降低了β-He x、组胺和IL-4的释放,明确了芸香柚皮苷在特定抗原OVA构建的高反应性脱颗粒免疫模型中的抗过敏活性及其作用机制,且发现芸香柚皮苷对两种模型脱颗粒的抑制机制不同。