脂多糖干预人神经母细胞瘤细胞G-CSFR表达及诱导凋亡的研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huashaosile
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目的:研究粒细胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)及其受体G-CSFR在儿童常见实体瘤中的表达;观察在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)干预下,G-CSFR在人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH中表达情况以及人神经母细胞瘤细胞凋亡情况。方法:①收集2008年9月至2011年6月重庆医科大学附属儿童医院实体肿瘤标本81例,其中:肾母细胞瘤27例,神经母细胞瘤25例,横纹肌肉瘤11例,畸胎瘤6例,淋巴瘤5例,透明细胞肉瘤4例,神经节细胞瘤3例;②免疫组化检测儿童常见实体瘤G-CSF和G-CSFR表达情况;③体外培养人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH,LPS按照0ug/ml、1ug/ml和10ug/ml干预,观察LPS干预后6h、12h和24h G-CSFR表达情况;神经母细胞瘤患者手术切取的新鲜肿瘤组织,用含10%FBS的DMEM培养基体外培养,LPS按照0ug/ml、50ug/ml、100ug/ml和200ug/ml干预,观察LPS干预后24h、48h和72h凋亡情况;④细胞免疫组化和RT-PCR检测在LPS干预后G-CSFR在人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH中表达情况;⑤TUNEL检测LPS干预后神经母细胞瘤肿瘤组织凋亡情况。结果:①81例肿瘤标本,G-CSF总阳性率为64.19%,G-CSFR总阳性率为67.90%;②27例肾母细胞瘤标本中G-CSF,G-CSFR阳性表达率分别是62.96%,66.67%。G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者16例(59.26%);③25例神经母细胞瘤标本中G-CSF,G-CSFR阳性表达率分别是68.00%,72.00%。G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者12例(48.00%);④11例横纹肌肉瘤标本中,G-CSF和G-CSFR的阳性表达率均是72.70%,G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者5例(45.45%);6例畸胎瘤标本中G-CSF和G-CSFR阳性表达率分别是50.00%,83.33%,G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者2例(33.33%);5例淋巴瘤标本中G-CSF和G-CSFR阳性表达率均是40.00%,G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者1例(20.00%);4例透明细胞肉瘤标本,G-CSF和G-CSFR阳性表达率均是75.00%,G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者3例(75.00%);3例神经节细胞瘤标本中,G-CSF和G-CSFR阳性表达率分别是66.67%,33.33%,G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者1例(33.33%);⑤神经母细胞瘤和肾母细胞瘤G-CSF,G-CSFR的表达与性别、年龄、病理分型和临床分期无显著相关性;⑥细胞免疫组化提示:当LPS浓度为0ug/ml时,随着时间延长,G-CSFR表达无明显差异,当LPS浓度为1ug/ml和10ug/ml,随着时间延长,G-CSFR表达减弱;⑦RT-PCR结果提示:当LPS浓度为0ug/ml时,各个时间点G-CSFR表达无统计学差异。随着时间延长以及LPS浓度的增高,G-CSFR的表达开始下降。在6h组中0ug/ml与1ug/ml相比无统计学差异P=0.056,0ug/ml与10ug/ml相比有统计学差异P=0.000,1ug/ml与10ug/ml相比有统计学差异P=0.027;12h组中0ug/ml、1ug/ml和10ug/ml各浓度组两两比较均有统计学差异,P<0.01;24h组中0ug/ml与1ug/ml、10ug/ml相比均有统计学差异P=0.01,P=0.001,1ug/ml与10ug/ml相比,无统计学差异P=0.164;⑧神经母细胞瘤体外组织培养中,当LPS浓度为0ug/ml和50ug/ml时0h、24h、48h和72h组凋亡指数无统计学差异,分别是P=0.417,P=0.059;浓度为100ug/ml和200ug/ml时0h、24h、48h和72h组凋亡指数有统计学差异,分别是P=0.002,P=0.009;LPS干预24h后,各浓度组之间凋亡指数无统计学差异P=0.247;LPS干预48h和72h后各浓度组之间凋亡指数有统计学差异,分别是P=0.000,P=0.013。结论:①G-CSF和G-CSFR在儿童常见实体瘤中高表达,无论性别、年龄、临床分期以及病理类型,均应检测肿瘤G-CSFR表达情况;对于G-CSFR阳性表达的患者,建议使用G-CSF时,应慎重考虑其对肿瘤的影响;②LPS可下调人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞G-CSFR表达;③LPS可以促进人神经母细胞瘤细胞的凋亡,但LPS的给药剂量及时间影响G-CSFR表达及凋亡。
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