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高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）是在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上发展起来的新型分离分析技术。鉴于其简便、快速、灵敏、准确的特点,至今,已在生物工程、制药工业、食品工业、环境监测、石油化工等领域获得广泛的应用。本文由综述和研究报告两部分组成。综述部分简单概述了高效液相色谱的特点、色谱技术方面的进展以及高效液相色谱及其联用技术在药物分析中的应用。研究报告部分建立了中药黄芪、蒲公英及长春花中几种成分的测定和血浆中奈替米星的测定方法,包括:反相高效液相色谱法同时测定黄芪中的4种酚酸;反相高效液相色谱法同时测定蒲公英中的6种活性成分;反相高效液相色谱法测定长春花中的4种吲哚类生物碱;柱前衍生高效液相色谱荧光法测定人血浆中的奈替米星。1.反相高效液相色谱法同时测定黄芪中的4种酚酸建立了黄芪中4种酚酸类化合物的高效液相色谱测定方法,并分析比较了提取方法和测定条件。实验色谱条件为:ZORBAX Eclipse XDB-C8柱（150×4.6mm i.d.;5μm）,以乙腈-0.4%冰醋酸水溶液（22:78,V/V,pH=2.9）为流动相,柱温:28℃,流速:0.8mL/min,检测波长为325nm和260nm,外标法定量。样品加标回收率在89.34%～103.45%之间,相对标准偏差小于4.5%。该法简便、快速、灵敏,可用于黄芪中4种酚酸的同时测定。2.反相高效液相色谱法同时测定蒲公英中的6种活性成分用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）建立了蒲公英中阿魏酸、咖啡酸、绿原酸、芸香苷、槲皮素和毛地黄黄酮的测定方法。色谱柱为SynergiFusion-RP column（150×4.6mm i.d.;4μm）柱;以甲醇-乙腈-水（磷酸调pH为2.6）为流动相,梯度洗脱。在优化的色谱条件下,6种化合物得到良好的分离。为了提高测定结果的准确度,采用二极管阵列检测器,在323nm和370nm波长下分别对它们进行测定。实验结果表明,几种化合物的重复性良好,峰面积的的相对标准偏差小于3.0%。样品加标回收率为97.39～104.71%。所建方法用于5种样品中6种化合物的同时测定,结果令人满意,为中药蒲公英的质量控制提供依据。3.反相高效液相色谱法测定长春花中的4种吲哚类生物碱采用反相高效液相色谱法分离测定长春花植物中的文多灵、长春质碱、长春新碱和长春碱4种吲哚类生物碱。色谱柱为Synergi Fusion-RP column（250×4.6 mmi.d.;4μm）柱,以甲醇-乙腈-0.5%三乙胺（磷酸调pH为6.8）（40:20:40,v/v/v）为流动相,等度洗脱。流速为1.5 mL/min,柱温为28℃,在220 nm波长下进行检测。在优化的色谱条件下,4种化合物得到良好的分离。该法用于长春花根、叶、茎提取液中文多灵、长春质碱、长春新碱和长春碱的测定,结果令人满意。4.柱前衍生高效液相色谱荧光法测定人血浆中的奈替米星建立一种简便、灵敏的氯甲酸芴甲酯（FMOC-Cl）柱前衍生荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中奈替米星的方法,新霉素为内标。采用ZORBAX EclipseXDB-C8柱,流动相为乙腈-水（90:10）。系统研究了pH值、反应时间及衍生化试剂用量对衍生反应的影响,确定最佳反应条件。血浆中奈替米星的线性范围为0.0475～4.75μg/mL;检测限（S/N=3,进样量10μL）为0.024μg/mL。平均回收率为92.4～103.2%。实验结果表明该方法选择性好,灵敏度高,准确度和精密度都较好。