【摘 要】
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Myostatin(MSTN)是肌肉生长抑制素，又称GDF-8，属于TGF-p超家族成员。该基因已被证明是是肌肉生长的负调控因子。自发突变或遗传操作(敲除或下调)造成的MSTN失活，已经被报道可以增加许多种动物的骨骼肌数量。RNA干扰(RNAi)是dsRNA介导的一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGs)现象。RNAi技术的出现为研究基因功能提供了一种快速而有效的基因敲除方法。病毒载体已经被开发用
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Myostatin(MSTN)是肌肉生长抑制素，又称GDF-8，属于TGF-p超家族成员。该基因已被证明是是肌肉生长的负调控因子。自发突变或遗传操作(敲除或下调)造成的MSTN失活，已经被报道可以增加许多种动物的骨骼肌数量。RNA干扰(RNAi)是dsRNA介导的一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGs)现象。RNAi技术的出现为研究基因功能提供了一种快速而有效的基因敲除方法。病毒载体已经被开发用于在哺乳动物细胞中递送s1RNA，其中利用慢病毒载体表达shRNA则是获得稳定RNA干扰的非常有效的办法。靶向myostatin的RNA干扰策略将可能用于增加动物的骨骼肌数量。因此，本研究拟探索用慢病毒载体表达shRNA沉默猪胎儿成纤维细胞中myostatin基因的可行性，为深入研究myostatin在猪的骨骼肌发育过程中的作用提供一些细节。通过这一策略，先用表达特异性shRNA的DNA载体瞬时转染PEF细胞，结果成功地抑制了细胞中myostatin的表达，下调效果显著(高达97%，P＜0.05)。对于慢病毒载体介导的RNAI，Real-timePcR的结果显示，稳定整合了慢病毒载体的PEF细胞中myostatin被持续地抑制了，说明获得了一个稳定有效的沉默效果(达到了94%，P＜0.05)。与此同时，本研究还检测了RNAI的负面效果，试验中用到的两个shRNA表达载体均没有在瞬时转染的细胞产生高水平的IFN-p和oAsZ表达。但出乎意料的是，在稳定转导的PEF细胞中检测到了高水平的IFN-p和oAsZ表达，分别是未转导细胞的2.49倍和14.43倍(p＜0.05)。结论:本试验成功地用慢病毒载体递送shRNA到了PEF细胞中，并触发了有效而稳定的myostatin沉默，但是对于长期使用该慢病毒载体，还需要尽量降低干扰素反应水平。另外，本研究获得的表达shRNA的慢病毒颗粒可以用于制备转基因胚胎，以生产具有“双肌”表型的动物。
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