【摘 要】
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目的:在已建立的稳定表达野生型PTEN、表皮生长因子受体(EGFRwt)和突变型表皮生长因子受体(EGFRvⅢ)的胶质母细胞瘤细胞系的基础上,在蛋白水平检测不同靶点的小分子蛋白激酶抑
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目的:在已建立的稳定表达野生型PTEN、表皮生长因子受体(EGFRwt)和突变型表皮生长因子受体(EGFRvⅢ)的胶质母细胞瘤细胞系的基础上,在蛋白水平检测不同靶点的小分子蛋白激酶抑制剂对胶质母细胞瘤细胞中EGFR下游信号通路的影响。
方法:应用RT-PCR和Western Blot法检测外源基因PTEN、EGFRwt、EGFRvⅢ在U87MG派生细胞系中的表达状态。应用MTT的方法检测tarceva对U87MG派生的四个细胞系的增殖抑制作用。应用Western Blot的方法检测小分子蛋白激酶抑制剂tarceva、rapamycin、LY294002及U0126对U87MG派生细胞系U87MG-P空、U87MG-PTEN、U87MG-EGFRwt、U87MG-EGFRvⅢ中EGFR下游信号通路的影响。
结果:外源基因PTEN、EGFRwt、EGFRvⅢ在U87MG派生细胞系中的稳定表达,并且表达的外源蛋白具有相应的生物学功能,可以用于后续的实验;单独应用tarceva对EGFR下游信号分子的活性基本无影响;单独应用rapamycin可引起ERK和AKT的反馈性活化;rapamycin、U0126或LY294002与tarceva联合应用基本可完全抑制RPS6的磷酸化。
结论:单一的小分子蛋白激酶抑制剂对EGFR下游的信号分子活性的影响不大或由于信号通路的网络式交互连接而引起其他信号分子的反馈性活化;tarceva与EGFR下游信号分子的抑制剂LY294002、rapamycin、U0126联合应用时可以产生较好的抑制效果。
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