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【目的】探究Spycatcher可作为一种新的促溶标签蛋白。【方法】1.通过分子生物学方法将Spycatcher基因与包涵体PD-1（细胞程序化死亡受体-1）、MPD-1（细胞程序化死亡受体-1突变体）、FTH-PD-1（铁蛋白重链偶联PD-1）基因融合构建到表达载体PET21a中。2.将构建好的PET21a-Spycatcher-PD-1、PET21a-Spycatcher-MPD-1、PET21a-sp-ycatcher-FTH-MPD-1质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,然后通过超声破碎将裂解的细胞上清进行镍柱纯化。3.运用E LISA定性检测Spycatcher-MPD-1与其配体PD-L1的结合。先将PD-L1包被在ELISA板上,实验组和对照组分别用HRP标记的Spycatc her-MPD-1和PBS孵育,在OD450条件下用酶标仪检测其吸光度值;然后将PD-L1蛋白进行生物素化标记,用fortebio法定量检测融合蛋白与PD-L1结合力的大小,同时检测在不同p H条件下Spycatcher-M PD-1与PD-L1的结合力。4.用荧光素CY5.5标记融合蛋白PET21a-S pycatcher-PD-1、PET21a-Spycatcher-MPD-1后,在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察其与乳腺癌细胞MDA-231表面高表达的PD-L1结合情况。5.随后,在已经纯化的融合蛋白溶液中加入适量的凝血酶,再经过镍柱纯化尝试得到不带Spycatcher标签的单体蛋白。【结果】1.测序结果表明构建的质粒目的基因核酸序列无误;2.通过镍柱表达纯化蛋白,纯度较高,可达85%以上;3.ELISA结果显示,实验sOD值明显高于对照组,提示实验组中Spycatcher-MPD-1和PD-L1的结合力强于空白对照组（P<0.01）4.fortebio法实验结果显示,Spycatcher-PD-1与PD-L1的结合力在10-8M左右,且不随着pH的改变而改变,而Spycatcher-MPD-1与PD-L1的结合力强于Spycat cher-PD-1与PD-L1的结合力,且随着pH的减小结合力逐渐增强。5.细胞实验结果表明,标记CY5.5的Spycatcher-PD-1和Spycatcher-MP D-1均可以结合细胞表面的PD-L1。6.凝血酶的酶切效果显示,Spyc atcher-Thrombin-MPD-1和Spycatcher-Thrombin-FTH-MPD-1的酶切效果良好,酶切之后可以得到不带Spycatcher的标签蛋白的单体蛋白。【结论】Spycatcher可以作为一种促溶标签蛋白。