蒲公英根提取物的抗食管鳞癌活性及机制研究

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目的:研究蒲公英根提取物(dandelion root extract,DRE)对食管鳞癌细胞生长的影响以及CBS/H2S体系在食管鳞癌中的作用,探讨DRE对食管鳞癌的抑制作用及机制。方法:采用MTT、EdU、细胞划痕、Transwell及细胞凋亡实验检测DRE对食管鳞癌细胞生长、增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,食道平散为阳性对照;应用Western Blot及H2S荧光探针法检测食管鳞癌细胞和食管正常上皮样细胞中胱硫醚-γ-裂解酶(Cystathionine-γ-lyase,CSE)和胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine-β-synthase,CBS)的表达水平及H2S水平;采用CBS siRNA转染食管鳞癌KYSE450和NEC细胞,检测CBS下调对食管鳞癌细胞生长、增殖、迁移和侵袭的影响,评价CBS/H2S体系在食管鳞癌中的作用;采用荧光探针法及Western Blot检测DRE对食管鳞癌细胞中H2S水平及CBS和CSE蛋白表达水平的影响;构建食管鳞癌移植瘤模型,检测DRE在体内对肿瘤生长的抑制情况,从而评价DRE的抗食管鳞癌作用。结果:1.MTT、EdU、细胞划痕、Transwell及细胞凋亡实验结果显示,DRE可有效抑制食管鳞癌KYSE450和NEC细胞的生长、增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡。而且DRE对食管正常上皮样细胞的毒性明显低于阳性对照食道平散。2.Western Blot实验结果显示,内源性H2S合成酶CSE在食管鳞癌细胞与食管正常上皮细胞中表达无显著差异,而内源性H2S合成酶CBS在食管鳞癌KYSE450、NEC、EC9706细胞中的表达水平高于食管正常上皮样NE-3细胞。3.H2S荧光探针实验结果显示,食管鳞癌KYSE450及NEC细胞的内源性H2S释放量明显高于食管正常上皮样NE-3细胞。4.采用CBS siRNA下调KYSE450和NEC细胞中CBS的表达后,KYSE450和NEC细胞内H2S的释放量明显减少,细胞的生长、增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制。5.DRE可呈剂量依赖性抑制KYSE450和NEC细胞中CBS的表达及H2S的释放,但其对细胞中CSE的表达无明显影响。6.DRE可以在体内明显抑制食管肿瘤的生长,与阳性对照组相比,抑瘤效果略强于阳性对照组,同时对机体无毒副作用。结论:1.DRE可有效抑制食管鳞癌KYSE450和NEC细胞的生长、增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡,DRE对食管正常上皮样细胞的毒性明显低于阳性对照食道平散。2.食管鳞癌细胞内的H2S水平高低取决于CBS水平,CBS/H2S体系的高表达可能促进了食管鳞癌的发生发展。3.DRE可能通过下调CBS/H2S体系发挥其抗食管鳞癌活性。4.DRE可以在体内抑制食管肿瘤的生长,可能对机体无毒副作用。
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