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目的：胰腺癌的发病率逐年上升。基于树突细胞的肿瘤疫苗成为研究的热点。但由于肿瘤介导的免疫耐受，使得树突细胞疫苗的效率大为降低。其中CD4+CD25+Treg细胞是导致肿瘤免疫耐受的重要因素。它通过释放TGF-β、IDO、IL-10等抑制性细胞因子使树突细胞(DC)、效应性T细胞功能受抑制。本实验探讨体外CpG ODN对模拟肿瘤环境下T淋巴细胞及树突状细胞的影响，以及通过降低Treg来对抗肿瘤免疫耐受环境的机制。为提高树突细胞疫苗效率提供理论依据。方法：取健康志愿者外周血单个核细胞。IL-4、Gm-CSF诱导树突状细胞，TNF-α刺激树突细胞成熟。尼龙毛柱法分离纯化T淋巴细胞。利用人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞上清模拟肿瘤免疫耐受环境。将ODN2006（B型CpG ODN）作用于模拟肿瘤环境中的淋巴细胞，ELISA分别检测24小时及48小时淋巴细胞上清中TGF-β的分泌情况。利用ODN2006作用后的淋巴上清刺激树突状细胞，流式细胞术检测树突状细胞表面分子CD80、CD83、CD86、MHC-II的表达，评估树突细胞成熟及功能，并用ELISA分别检测24小时及48小时树突细胞分泌细胞活性因子IL-6的情况。流式细胞仪检测CpG ODN对Treg细胞分化的影响。混合淋巴细胞培养后ELISA检测淋巴细胞IFN-γ的分泌量，并在树突细胞负载肿瘤抗原后利用MTT法检测ODN2006诱导CTL细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用。结果：1.ODN2006作用于淋巴细胞24及48小时后明显降低模拟肿瘤环境中TGF-β的分泌量；2.ODN2006作用下，模拟肿瘤环境中树突细胞表面分子CD83、CD86明显增加，MHC-II分子及CD80表达未见明显差异。3.BxCpG组树突细胞在淋巴细胞上清刺激48小时后高表达白细胞介素6（IL-6）；4.ODN2006作用后48小时CD4+CD25+Treg细胞较其余各组明显减少,但加入anti-IL-6中和抗体后，ODN2006减少Treg细胞数量的作用受到抑制。5.Westernblot及免疫荧光结果显示：ODN2006处理后，BxCpG组树突细胞内核转录因子NF-kB表达量明显高于Bx组，但加入anti-IL-6中和抗体后，树突细胞NF-kB表达量低于BxCpG组及Bx组。6.混合淋巴细胞培养后，BxCpG组IFN-γ分泌量较Bx组高，加入anti-IL-6中和抗体的antiIL-6BxCpG组IFN-γ分泌量低于BxCpG组及Bx组。7.胰腺癌细胞杀伤实验中，BxCpG组杀伤胰腺癌细胞的效率最高，Bx组最低，antiIL-6BxCpG组杀伤效率低于BxCpG组，但高于Bx组。结论：1. CpG ODN可以促进模拟肿瘤环境中树突细胞的成熟及功能。2.CpGODN可以降低淋巴细胞TGF-β的分泌量并通过减少CD4+CD25+Treg细胞的数量来对抗肿瘤免疫耐受，这一对抗作用可能是通过刺激树突细胞分泌IL-6来实现的。3．CpG的加入有效的刺激模拟肿瘤环境下淋巴细胞分泌IFN-γ，并增强细胞毒性T淋巴细胞杀伤肿瘤的能力。