舌鳞状细胞癌(T0ngue squamous cell carcinoma，TSCC)是头颈部常见的恶性肿瘤之一，约占头颈部肿瘤的40-50﹪，目前主要的治疗手段是手术、放疗及化疗，但总的治疗效果不理想，5年生存率只有60﹪左右，且患者生存质量不高。 癌的发生是一个多因素、多阶段、复杂渐进的过程，干预或终止其中某个或多个相关因素或过程，能够改变癌发生发展的进程，达到化学预防和治疗的目的。针对肿瘤生长相关因子，在基因水平进行干预，是恶性肿瘤的基因治疗策略。 转化生长因子-β是一类具有多种生物学效应的多肽类细胞因子超家族，对机体许多组织细胞生长和分化具有重要的调节作用，其中转化生长因子β1最为重要，机体多种细胞能分泌产生。许多肿瘤组织和细胞高表达TGF-β1，其刺激新血管生成，细胞迁徙及细胞外基质堆积，导致肿瘤的发生、发展和浸润转移。头颈部肿瘤中TGF-β1的表达比正常组织中的表达要高；有淋巴结转移者较之无淋巴结转移要高得多。 NO在体内起重要的信号传到作用，NO与其合成酶-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肿瘤发生发展有很多分子机制发挥作用，促进肿瘤血管生成、抑制细胞调亡等。头颈部肿瘤中iNOS的表达升高明显，与TGF-β关系密切，参与肿瘤新血管形成、细胞外基质堆积，共同促进肿瘤的发生发展，促进肿瘤的转移浸润。 RNA干扰(RNA interference，RNAi)是特异性基因表达沉默的强有力手段之一。 其广泛存在真核生物中，是生物体在进化上的一种保守的基因组水平的免疫监控机制。具有高度特异性、高效率、放大效应并可遗传的特点。因此针对肿瘤基因在肿瘤细胞内引发RNAi效应，将可能开辟肿瘤基因治疗的新途径。本研究以人舌鳞癌Tca8113细胞为研究对象，探讨RNA干扰技术沉默TGF-β1基因后对Tca8113细胞增殖活性及iNOS基因表达的影响。主要研究方法和结果有以下几方面： 1.RNA干扰技术沉默TGF-β1基因对舌鳞癌细胞增殖活性影响。 根据siRNA设计原则，设计针对TGF-β1基因的siRNA，予以化学合成，应用脂质体LIPOFECTAMINE 2000介导转染Tca8113细胞，并设置阴性对照组和空白对照组。用MTT法、免疫细胞化学及流式细胞仪分别检测各组细胞。绘制细胞生长曲线，显示转染特异性TGF-β1基因siRNA片断后，细胞生长受抑制明显；免疫细胞化学显示TGF-β1蛋白表达降低；流式细胞仪检测发现沉默TGF-β1基因后，细胞凋亡明显增加。 2．TGF-β1基因沉默对Tca8113细胞VEGF及iNOS表达影响Tca8113细胞细胞培养后，转染特异性TGF-β1基因siRNA片断并设置阴性对照组。以RT-PCR法检测TGF-β1基因沉默后VEGF及iNOS基因表达。结果显示基因沉默后TGF-β1、VEGF基因表达下调明显，且iNOS基因表达也随之下调。 结论 1.舌鳞癌Tca8113细胞中TGF-β1高表达； 2．通过RNAi可以降低TGF-β1基因的表达，达到基因沉默的效果； 3.RNAi沉默TGF-β1基因可促进Tca8113细胞的凋亡，并降低Tca8113细胞的细胞增殖活性； 4．TGF-β1和VEGF和iNOS之间存在着密切联系。TGF-β1基因沉默可以降低Tca8113细胞中VEGF的表达水平，且下调细胞中iNOS的表达。