【摘 要】
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A型γ-氨基丁酸(aminobutyric acid,GABA)受体是一类配体门控离子通道型受体,是脊椎动物和非脊椎动物的中枢神经系统内最主要的抑制性神经递质GABA的受体,由其同源或异源五聚体构
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A型γ-氨基丁酸(aminobutyric acid,GABA)受体是一类配体门控离子通道型受体,是脊椎动物和非脊椎动物的中枢神经系统内最主要的抑制性神经递质GABA的受体,由其同源或异源五聚体构成的离子通道上存在许多药物的作用靶点,因此该受体也是医药和农药工作者研究的重点。但是天然的受体在个体上的数量比较少,亚克隆表达有利于大量获得有活性的受体,对于开发新的,高效的,安全的农药具有重要的指导意义。本文通过分子亚克隆技术尝试对脊椎动物和昆虫的GABA受体及其突变抗狄氏剂的受体(RDL)的克隆及异源表达做了部分研究。本实验采用分子生物学实验方法研究果蝇GABA受体的整体及部分结构的信息。从NCBI库上搜到的果蝇的RDL全序列分为全长,和截去部分N端胞外区进行构建,分别与表达载体pET21a融合,结果是在37℃IPTG0.5mM诱导3h条件下E.coli BL21(DE3)细胞里诱导表达,全长含有HisTag的蛋白有表达,而截去部分未表达即使换表达菌株也无表达。通过SDS-PAGE电泳图谱检测,后通过western blot检测表达蛋白的特异性结果正确但纯度及量都不够。本文是首次用原核体系尝试表达真核动物的GABA受体全长(RDL)。
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