论文部分内容阅读
本实验以江苏省农科院园艺研究所草莓资源圃保存的‘红颊’草莓品种的组培苗为外植体进行实验。‘红颊’是一种优质大果型草莓品种,其颜色鲜艳,着色一致,外形美观,香味口感极佳,但是炭疽病发病率高已经成为其产量增长的重要影响因素之一。本实验目的是通过EMS诱变筛选出定向突变的抗炭疽病新植株。首先探讨激素,放置方式,暗培养时间,温度,不同部位等条件对其再生的影响,筛选出最佳组合以优化其再生体系,运用最小显著极差法处理实验数据,探讨不同植物生长调节剂组合(IBA, NAA, IAA)、暗培养时间(5,10,15,20d)、放置方式(正面朝上,反面朝上)、不同取材部位(叶柄,叶片)对其再生的影响。结果表明：MS+TDZ(2.0mg·L-1)+NAA(0.1mg·L-1)为最适宜的不定芽分化培养基,不定芽分化率最高可达到100.0%,一周(7天)是最佳的暗培养时间,叶片正面朝上放置较好。叶柄再生能力比叶片强,两者都是基部比顶部分化率高,诱导能力从强到弱可依次排列为叶柄基部>叶片基部>叶片顶部>叶柄顶部。最佳生根培养基为1/2MS+IBA (0.1mg-L-1),20天后100%的不定芽可长出3-4cm长的根,移栽成活率达到98.06%。由此建立起‘红颊’草莓品种的高效再生体系。然后配置浓度分别为0.05%,0.10%,0.2%,0.4%,0.8%的5个梯度EMS诱变液,设空白对照。将诱变材料放入不同浓度诱变液1h探讨不同浓度对其影响。同时将诱变材料放入0.1%的诱变液处理时间分别为0.5,1.0,1.5,2.0h,以探讨不同诱变时间对其影响。还将诱变材料放入0.1%的诱变液处理1.0h,以探讨处理后其内部不同活性指标的变化。根据PPO、SOD等活性物质的变化,推测EMS较低浓度,较短时间处理下,细胞能自身修复,一旦超过临界点,则伤害无法得到修复。0.8%浓度的EMS诱变液配以长时间处理,短时间内实验材料褐化死亡,而在0.2%浓度的EMS诱变液配以短时间处理,处理后的材料无褐化死亡现象或者褐化率过低。得出诱变组合为浓度为0.2%,处理时间为80min；浓度为0.4%,处理时间为60min；浓度为0.4%,处理时间为60min这三种组合均可。将诱变得到的再生芽转接到Ms培养基培养中培养,待其长大后移入生根培养基。当根长到3-4cm长时移到穴盘内进行培养,待其长成后用用浓度为每毫升7×106个孢子的炭疽菌孢子悬浮液喷洒植株表面,初步筛选出表型为抗炭疽病的草莓植株5株。这些抗性植株的遗传基因需进一步进行分子学验证。