S-生物丙烯菊酯免疫分析方法研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuantang88
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目前,世界上使用的农药中手性农药的比例达到了25%,而拟除虫菊酯类杀虫剂中几乎所有的农药都是手性农药。同一手性农药的各个对映异构体间不仅对靶标生物的杀虫除草杀菌活性具有对映体选择性,而且对非靶标生物也会产生对映体选择性的毒性。为了降低农药的使用量和保护环境免受侵害,对手性农药进行检测方法的研究则显得十分有必要。免疫分析技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适宜现场监控和同时筛选大量样品等优点,在农药残留快速检测中发挥着重要的作用。本研究以菊酯类杀虫剂S-生物丙烯菊酯为研究对象,建立了s-生物丙烯菊酯的间接竞争ELISA法和ECL-ELISA法,并应用于环境样品中s-生物丙烯菊酯残留检测。设计合成s-生物丙烯菊酯半抗原,将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫原和包被原,成功建立了基于多克隆抗体的s-生物丙烯菊酯的酶联免疫分析方法。经紫外光谱分析证明成功合成了免疫和包被用人工抗原,S-生物丙烯菊酯免疫原和包被原的结合比分别为32:1和10:1。用免疫抗原免疫雄性新西兰大白兔,获得相应的多克隆抗体,用间接非竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定S-生物丙烯菊酯抗体的效价达到8×105。通过方阵滴定法筛选包被抗原和抗体的最适工作浓度,进一步研究有机溶剂、离子强度和pH值在间接竞争ELISA (ic-ELISA)中对抗体亲和作用的影响,确立了s-生物丙烯菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件为:40%甲醇、0.5mol/L Na+、pH6.5.在最优条件下,建立了S-生物丙烯菊酯的ic-ELISA方法的标准曲线。除与ES-生物丙烯菊酯、富右旋丙烯菊酯和丙烯菊酯有交叉反应外,与大部分菊酯类农药没有明显的交叉反应,表明抗体具有很高的立体选择性。该方法的抑制中浓度IC50为0.089mg/L,最低检测限(IC10)为0.0025mg/L。通过采用增强化学发光酶免疫分析(ECL-ELISA)手段,IC50在此基础上又降低了3.56倍,达到0.025mg/L,最低检测限(IC10)降低了2.5倍,达到0.001mg/L。以建立的ic-ELISA和ECL-ELISA分析方法,进行了自来水、河水、蒸馏水和尘土的添加回收率试验,添加浓度分别为为0.05mg/L (mg/kg)-0.5mg/L (mg/kg),0.01mg/L (mg/kg)-0.1mg/L (mg/kg),添加回收率分别为90.7%-111.7%,78.9%-100.7%,变异系数分别为1.2%-6.5%,1.2%-3.9%。用气相色谱验证ic-ELISA和ECL-ELISA检测的结果。结果显示两种检测方法与GC有很好的相关性(R2=0.9882,0.998)。基于多克隆抗体的ic-ELISA和ECL-ELISA可以高灵敏、快速便捷和低成本的应用于环境样品中S-生物丙烯菊酯残留物的检测。
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