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氟罗沙星（Fleroxacin,FLE）是第三代氟喹诺酮类抗菌剂,抗菌谱广,针对不同的细菌有着很强抗菌活性,而且吸收快、使用方便,因此被广泛用于畜牧、水产等行业。但其高残留的动物源性食物被人们进食后会引起毒副作用,包括皮肤发红、过敏性休克、刺激中枢神经系统、破坏软骨组织。同时这些抗菌剂也存在于水中,对公众健康构成危害。以量子点（Quantum dots,QDs）为标记的荧光免疫分析法（Fluorescent-linked immunosorbent assay,FLISA）由于其高的灵敏性而常被用于抗生素、毒素等残留的检测中,目前尚未有基于QDs的荧光免疫分析法检测FLE残留的报道,本研究制备了抗FLE单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab）并将其与QDs偶联,建立了快速、灵敏的直接和间接的荧光免疫分析方法（Direct and indirect competitive fluorescence-linked immunosorbent assays,FLISA and ic FLISA）来检测FLE。本研究通过碳二亚胺法将FLE分别与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）和鸡卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）偶联合成免疫原FLE-BSA、包被原FLE-OVA。并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和紫外扫描光谱的方法鉴定,结果表明完全抗原合成成功。用FLE-BSA免疫小鼠,其中1号小鼠的多抗血清效价最高可达1:2.048×105,半数抑制浓度IC50为23.44 ng/m L。选择1号小鼠进行细胞融合,共筛选出8株杂交瘤细胞株,选择阳性值最高的5F10单克隆细胞株制备腹水并进行纯化。采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA）测得纯化后的5F10单克隆抗体效价为1:1.024×106,亲和常数为1.08×109L/mol,间接竞争ELISA（Indirect Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ic-ELISA）建立抑制曲线测得其IC50值为1.28 ng/m L,5F10单克隆抗体与其类似物环丙沙星的交叉反应率为0.26%,与氟甲喹的交叉反应率为0.056%、恶喹酸和沙拉沙星交叉反应率均小于0.01%。制备的抗FLE单克隆抗体特异性强,敏感性好,可以用来建立FLISA。采用碳二亚胺法,将抗FLE单克隆抗体与QDs偶联,制备m Ab-QDs荧光探针,建立了FLISA;同时又制备出二抗-QDs荧光探针,建立了ic FLISA。FLISA和ic FLISA建立的抑制曲线测得IC50值分别为0.32 ng/m L和0.19 ng/m L,其灵敏性比ic-ELISA的更好,检出限分别为0.012 ng/m L和0.006 ng/m L,加标回收实验测得回收率为93.80%-112.41%,变异系数小于15%。以上结果表明,新的FLISA和ic FLISA两种免疫测定方法在检测猪肉样品中FLE的残留有一定的可行性。