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目的:以传统补肾方剂青娥方为研究对象,围绕青娥方的雌激素样作用开展青娥方与各组方药味配伍前后的药效学比较研究,从体内、体外药效学相互作用角度探讨青娥方的配伍规律。方法:1.采用去势大鼠模型比较靑娥方及其各单味药的雌激素样作用。运用ELISA试剂盒检测青娥方及其拆方对去势大鼠血清激素水平、血脂、神经递质水平及抗氧化能力的影响;HE染色及免疫组化法探究对去势大鼠靶器官形态学及其雌激素受体表达的影响;蛋白质免疫印迹法（WB）检测对去势大鼠子宫中雌激素通路相关蛋白表达的影响。2.采用MCF-7细胞增殖实验,稳定转染ERα-ERE、ERβ-ERE荧光素酶报告基因的HEK293细胞荧光表达实验研究青娥方及其配伍组合物的雌激素样作用。CCK-8法检测靑娥方及其配伍组合物对MCF-7细胞活力的影响;荧光素酶报告基因实验比较靑娥方及其配伍组合物对ER受体亚型的选择性;蛋白质免疫印迹法检测对MCF-7细胞中雌激素通路相关蛋白雌激素受体ERα、ERβ和雌激素膜受体G蛋白偶联受体（GPR30）表达的影响;实时定量荧光PCR法检测对雌激素受体ER相关基因ERα、ERβ和PS2的表达。结果:1.靑娥方及其各单味药的雌激素样作用比较药效学研究结果表明:青娥方全方组及君药杜仲组、臣药补骨脂组均能对抗去势（OVX）造成的子宫指数下降,与模型组比较有显著性差异;青娥方、杜仲、补骨脂组均能降低OVX大鼠的促黄体素LH、卵泡刺激素FSH水平,升高雌二醇E2水平,且青娥方和补骨脂能将雌二醇水平恢复至正常水平;去势大鼠模型组较假手术组体重显著升高,而青娥丸组、补骨脂组能降低去势大鼠体重增长过快的趋势,提示青娥丸、补骨脂能拮抗去势导致的大鼠体重增加;青娥方、补骨脂组可以显著降低大鼠血清中总胆固醇T-CHO的含量,各组可显著性降低甘油三酯TG的含量,只有青娥方、补骨脂组能显著升高高密度脂蛋白HDL-C的含量并恢复至正常组水平,青娥方、杜仲、补骨脂、大蒜组能显著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量,提示青娥方及其拆方配伍组均能不同程度地改善OVX大鼠因雌激素缺乏导致的脂代谢紊乱的情况,但尤以青娥方、补骨脂的效果为佳;青娥方、大蒜组可以显著升高OVX大鼠血清中芳香化酶水平;青娥方能显著升高OVX大鼠的血清SOD含量,降低MDA含量;青娥方及其单味药均能显著降低单胺类神经递质5-羟色胺（5-HT）含量,除杜仲外各组均能显著性降低5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）的含量,尤以全方的趋势最优;HE染色形态学研究结果表明,青娥方、杜仲、补骨脂能拮抗OVX引起的子宫萎缩;青娥丸、杜仲、补骨脂均能对去势引起的肝脏脂肪空泡有改善作用;免疫组化法发现青娥方、杜仲、补骨脂组能明显提高OVX大鼠子宫ERs的表达,且青娥方可将ERs提高至与假手术组相当的水平;WB法检测发现青娥方能明显上调OVX大鼠子宫ERα和ERβ的蛋白表达,在ERα的表达中,EC有上调的趋势,但是无统计学意义,但仍能恢复至空白组水平;同时E2、QEF、EC能明显上调子宫ERβ的受体表达,PF具有上调的趋势但无统计学意义,但能恢复至与空白组相当;另外发现补骨脂组实验动物的食物摄取率与正常组相比显著下降,青娥方未观察到类似副作用。2.青娥方及其配伍组合物的雌激素样作用体外实验研究表明:（1）将青娥方拆方后,各单味药除大蒜外,杜仲、补骨脂、核桃仁都能直接作用MCF-7细胞使之增值,但以补骨脂的活性最强,在1 mg生药/ml、0.5 mg生药/ml、0.1 mg生药/ml浓度均能促进MCF-7细胞增殖,杜仲活性次之,在1 mg生药/ml、0.5 mg生药/ml浓度时能促进MCF-7细胞增殖;核桃仁活性最弱,仅在1 mg生药/ml浓度时能促进MCF-7细胞增殖。将各单味药两两配伍后发现,补骨脂+杜仲组作用最强,它们分别配伍核桃仁、大蒜后,配伍核桃仁组的增殖率大于配伍大蒜组,也符合它们佐使的地位;但仍以四味药配伍组合而成的青娥丸提取物的促MCF-7细胞增殖作用最强,其在1mg生药/ml、0.5mg生药/ml、0.1mg生药/ml、0.05mg生药/ml浓度均能促进MCF-7细胞增殖;（2）青娥方在0.05～1 mg生药/m L、补骨脂在0.01～1mg生药/m L、杜仲在1mg生药/m L能明显促进转染ERα-ERE报告基因的HEK293细胞荧光素酶表达;青娥方在0.1～1 mg生药/m L、补骨脂在0.01～1m生药g/m L、杜仲在1 mg生药/m L能明显促进转染ERβ-ERE报告基因的HEK293细胞荧光素酶表达;大蒜、核桃仁对于转染ERα-ERE、ERβ-ERE报告基因的HEK293细胞荧光素酶表达没有显著性作用;结果提示,青娥方、补骨脂、杜仲的雌激素样作用通过雌激素受体通路并通过与ERE结合位点结合发挥作用;（3）在分子和基因水平发现,在0.1、0.5 mg生药/ml时,青娥方能显著上调MCF-7细胞ERα、ERβ,PS2的蛋白以及基因水平的表达;杜仲在0.5 mg生药/ml时,上调PS2蛋白和基因的表达;而补骨脂在0.5 mg/ml时上调ERα的蛋白表达;君、臣药在0.1 mg/ml对于各蛋白均没有显著性上调;此外杜仲还能上调雌激素膜受体GPR30的表达;青娥方、杜仲、补骨脂均可上调ERα、ERβ、PS2基因的表达,但青娥方的作用大于单味药,在较低浓度时即可发挥作用;实验结果表明较低浓度时青娥方仍然具有较好的活性。结论:1.体内药效学结果表明青娥方及其君药杜仲、臣药补骨脂能够上调去势大鼠子宫系数和血清激素水平,具有雌激素样作用;青娥方及其拆方配伍组均能不同程度地改善OVX大鼠因雌激素缺乏导致的脂代谢紊乱和神经递质紊乱,增强其血清抗氧化能力;同时青娥方还能对抗去势导致的大鼠体重增加;HE染色结果标明,青娥方、杜仲、补骨脂可以拮抗OVX大鼠的子宫萎缩,改善OVX大鼠肝脏脂肪空泡现象,并对肾上腺有温和的刺激作用;免疫组化和WB分析结果表明青娥方、杜仲、补骨脂均能上调OVX大鼠子宫ERs受体水平。综上所述,青娥方中杜仲、补骨脂具有雌激素样作用,符合其君药、臣药地位;而青娥方的雌激素样作用最强,是四味药发挥协同增效作用的结果;且青娥方能拮抗补骨脂单独给药造成的实验动物食欲减退,从体内药效学角度解释了青娥方配伍增效的作用机制。2.体外实验结果表明,青娥方及君药杜仲,臣药补骨脂均具有促MCF-7细胞增殖作用,当君、臣药配伍使用时,显示两药具有协同作用,但仍以配伍后的青娥丸促增殖作用最强;青娥方、杜仲、补骨脂主要通过雌激素受体通路发挥作用,而青娥方在较低浓度仍然具有较好的药效,从体外实验角度说明青娥方配伍的精当和科学性。