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目的：“肝主疏泄，调畅情志”是中医脏象理论主要研究内容，揭示其深入微观机制是推动脏象理论由现象描述迈向本质阐明的必由之路。因此，围绕“肝主疏泄，调畅情志”脑中枢机制这一关键问题，本文以PMDD肝气逆证大鼠模型为载体，在此基础上观察PMDD肝气逆证发病机制及特定脑区内ALLO介导GABAAR功能之间的相互关系。以期解释肝疏泄太过部分中枢机制，证明分型治疗的必要性，为临床有效治疗PMDD肝气逆证提供实验证据。
方法：①通过对PMDD肝气逆证中医及现代医学的文献梳理，提出“ALLO介导GABAAR功能失调是PMDD肝气逆证发病机制之一”的假设；②应用社会隔离及居住入侵应激诱导PMDD肝气逆证大鼠模型，观察PMDD肝气逆证大鼠攻击行为、高架十字迷宫、旷场实验，血清及特定脑区中激素、神经递质含量，特定脑区GABAARα4亚基的表达；③通过给予外源性ALLO及其拮抗剂观察大鼠攻击行为、高架十字迷宫、旷场实验，血清及特定脑区中激素、神经递质含量，特定脑区GABAARα4亚基的表达等结果，对假设进行进一步的反证；④应用上述实验中的含药血清干预大鼠大脑海马神经元细胞，观察Cl-通道的变化，通过细胞实验进一步阐明ALLO介导GABAAR功能变化是PMDD肝气逆证重要发病机制之一。
结果：①行为学评价结果显示：PMDD肝气逆证模型大鼠在攻击行为测试中，表现为焦虑、易激惹，攻击行为得分远高于正常组（P＜0.01）,给予外源性ALLO后，大鼠攻击行为得分与模型组相比显著降低（P＜0.01），而非那雄胺组的攻击行为得分比模型组显著升高（P＜0.05）；在高架十字迷宫实验中，模型组进入开放臂次数百分比（OE%）及开放臂停留时间百分比（OT%）明显降低（P＜0.01，P＜0.05），ALLO组的OE%、OT%与模型组相比显著升高（P＜0.01）；在OFT实验中，模型组大鼠总路程及进入中央区次数明显低于正常组（P＜0.01，P＜0.05），给予外源性ALLO后，大鼠总路程及进入中央区次数显著升高（P＜0.05）。说明PMDD肝气逆证模型大鼠在行为学表现出攻击性与焦虑样特点，外源性ALLO能显著改善其异常行为，说明其PMDD肝气逆证异常情绪的发生与ALLO有密切的关系。
②血清及特定脑区激素、神经递质含量的研究结果：与正常组相比，模型组大鼠血清中PROG的含量明显上升（P＜0.05），ALLO及CORT含量显著下降（P＜0.05）；前额叶和海马中，PROG的含量显著下降（P＜0.01，P＜0.05），下丘脑中,模型组大鼠PROG含量明显上升（P＜0.01），ALLO含量明显下降（P＜0.01）；杏仁核中，模型组中ALLO含量明显下降（P＜0.01）。
给予外源性ALLO后，与模型组相比，ALLO组大鼠前额叶中PROG、ALLO含量显著上升（P＜0.05），海马中只有PROG含量上升（P＜0.05）；下丘脑中，PROG含量明显下降（P＜0.05），ALLO含量上升（P＜0.01）；杏仁核内ALLO浓度上升（P＜0.01）。
在UHPLC-MS/MS实验中，与正常组相比，模型组大鼠血清中Glu、GABA及Glu/GABA均显著下降（P＜0.01，P＜0.05），5-HT含量明显上升（P＜0.05），给予外源性ALLO后，大鼠血清中GABA上升（P＜0.05），5-HT含量下降（P＜0.01）。说明ALLO可以通过提高大鼠血清中GABA浓度发挥作用。
以上结果说明PMDD肝气逆证与外周及特定脑区中ALLO含量减少以及GABA、Glu/GABA显著降低关系密切,而外源性ALLO可以显著改善上述异常，进一步阐明ALLO对特定脑区及外周GABA、Glu/GABA的调节与PMDD肝气逆证的发病机制关系密切。
③在免疫荧光和RT-PCR实验中α4亚基的变化趋势一致，与正常组相比，模型组大鼠杏仁核中GABAARα4表达显著下降（P＜0.01），而海马脑区内GABAARα4表达显著上升（P＜0.01）。给予外源性ALLO后，ALLO组杏仁核脑区中GABAARα4mRNA表达明显上升（P＜0.01，P＜0.05），海马中GABAARα4mRNA表达下降（P＜0.05）；各组大鼠前额叶、下丘脑中GABAARα4表达无显著差异。
说明PMDD肝气逆证模型大鼠发病机制与杏仁核、海马中GABAARα4表达异常相关，且与ALLO的调节关系密切。
④细胞膜片钳实验结果：通过制备海马神经元，观察PMDD肝气逆证模型大鼠血清对海马神经元氯离子通道的影响，发现与正常组相比，模型组大鼠血清干预海马神经元后，神经元Cl-电流密度显著降低（P＜0.01，P＜0.05），外源性ALLO干预大鼠血清给予海马神经元后，神经元Cl-电流密度明显上升（P＜0.05），非那雄胺干预大鼠组血清对Cl-电流密度与模型组相比并无显著差异。
结论：通过文献梳理及实验研究可以得出以下结论：①PMDD肝气逆证模型大鼠在行为学中表现出攻击性和焦虑样情绪，外源性ALLO可以改善其攻击和焦虑样行为；②PMDD肝气逆证大鼠外周及特定脑区中ALLO、GABA、Glu/GABA显著降低,杏仁核、海马中GABAARα4表达异常，PMDD肝气逆证大鼠血清干预海马神经元，Cl-电流密度显著降低，而外源性ALLO可以显著改善上述异常表达。综上，ALLO介导GABAAR功能改变是PMDD肝气逆证发病机制之一，主要是通过改变杏仁核和海马中GABAARα4亚基的表达发挥作用。
方法：①通过对PMDD肝气逆证中医及现代医学的文献梳理，提出“ALLO介导GABAAR功能失调是PMDD肝气逆证发病机制之一”的假设；②应用社会隔离及居住入侵应激诱导PMDD肝气逆证大鼠模型，观察PMDD肝气逆证大鼠攻击行为、高架十字迷宫、旷场实验，血清及特定脑区中激素、神经递质含量，特定脑区GABAARα4亚基的表达；③通过给予外源性ALLO及其拮抗剂观察大鼠攻击行为、高架十字迷宫、旷场实验，血清及特定脑区中激素、神经递质含量，特定脑区GABAARα4亚基的表达等结果，对假设进行进一步的反证；④应用上述实验中的含药血清干预大鼠大脑海马神经元细胞，观察Cl-通道的变化，通过细胞实验进一步阐明ALLO介导GABAAR功能变化是PMDD肝气逆证重要发病机制之一。
结果：①行为学评价结果显示：PMDD肝气逆证模型大鼠在攻击行为测试中，表现为焦虑、易激惹，攻击行为得分远高于正常组（P＜0.01）,给予外源性ALLO后，大鼠攻击行为得分与模型组相比显著降低（P＜0.01），而非那雄胺组的攻击行为得分比模型组显著升高（P＜0.05）；在高架十字迷宫实验中，模型组进入开放臂次数百分比（OE%）及开放臂停留时间百分比（OT%）明显降低（P＜0.01，P＜0.05），ALLO组的OE%、OT%与模型组相比显著升高（P＜0.01）；在OFT实验中，模型组大鼠总路程及进入中央区次数明显低于正常组（P＜0.01，P＜0.05），给予外源性ALLO后，大鼠总路程及进入中央区次数显著升高（P＜0.05）。说明PMDD肝气逆证模型大鼠在行为学表现出攻击性与焦虑样特点，外源性ALLO能显著改善其异常行为，说明其PMDD肝气逆证异常情绪的发生与ALLO有密切的关系。
②血清及特定脑区激素、神经递质含量的研究结果：与正常组相比，模型组大鼠血清中PROG的含量明显上升（P＜0.05），ALLO及CORT含量显著下降（P＜0.05）；前额叶和海马中，PROG的含量显著下降（P＜0.01，P＜0.05），下丘脑中,模型组大鼠PROG含量明显上升（P＜0.01），ALLO含量明显下降（P＜0.01）；杏仁核中，模型组中ALLO含量明显下降（P＜0.01）。
给予外源性ALLO后，与模型组相比，ALLO组大鼠前额叶中PROG、ALLO含量显著上升（P＜0.05），海马中只有PROG含量上升（P＜0.05）；下丘脑中，PROG含量明显下降（P＜0.05），ALLO含量上升（P＜0.01）；杏仁核内ALLO浓度上升（P＜0.01）。
在UHPLC-MS/MS实验中，与正常组相比，模型组大鼠血清中Glu、GABA及Glu/GABA均显著下降（P＜0.01，P＜0.05），5-HT含量明显上升（P＜0.05），给予外源性ALLO后，大鼠血清中GABA上升（P＜0.05），5-HT含量下降（P＜0.01）。说明ALLO可以通过提高大鼠血清中GABA浓度发挥作用。
以上结果说明PMDD肝气逆证与外周及特定脑区中ALLO含量减少以及GABA、Glu/GABA显著降低关系密切,而外源性ALLO可以显著改善上述异常，进一步阐明ALLO对特定脑区及外周GABA、Glu/GABA的调节与PMDD肝气逆证的发病机制关系密切。
③在免疫荧光和RT-PCR实验中α4亚基的变化趋势一致，与正常组相比，模型组大鼠杏仁核中GABAARα4表达显著下降（P＜0.01），而海马脑区内GABAARα4表达显著上升（P＜0.01）。给予外源性ALLO后，ALLO组杏仁核脑区中GABAARα4mRNA表达明显上升（P＜0.01，P＜0.05），海马中GABAARα4mRNA表达下降（P＜0.05）；各组大鼠前额叶、下丘脑中GABAARα4表达无显著差异。
说明PMDD肝气逆证模型大鼠发病机制与杏仁核、海马中GABAARα4表达异常相关，且与ALLO的调节关系密切。
④细胞膜片钳实验结果：通过制备海马神经元，观察PMDD肝气逆证模型大鼠血清对海马神经元氯离子通道的影响，发现与正常组相比，模型组大鼠血清干预海马神经元后，神经元Cl-电流密度显著降低（P＜0.01，P＜0.05），外源性ALLO干预大鼠血清给予海马神经元后，神经元Cl-电流密度明显上升（P＜0.05），非那雄胺干预大鼠组血清对Cl-电流密度与模型组相比并无显著差异。
结论：通过文献梳理及实验研究可以得出以下结论：①PMDD肝气逆证模型大鼠在行为学中表现出攻击性和焦虑样情绪，外源性ALLO可以改善其攻击和焦虑样行为；②PMDD肝气逆证大鼠外周及特定脑区中ALLO、GABA、Glu/GABA显著降低,杏仁核、海马中GABAARα4表达异常，PMDD肝气逆证大鼠血清干预海马神经元，Cl-电流密度显著降低，而外源性ALLO可以显著改善上述异常表达。综上，ALLO介导GABAAR功能改变是PMDD肝气逆证发病机制之一，主要是通过改变杏仁核和海马中GABAARα4亚基的表达发挥作用。