猪流感(swine influenza, SI)是由猪流感病毒(swine influenza virus, SIV)引起的一种急性传染性呼吸道疾病，临床表现发病率高、死亡率低，导致猪群严重发病往往是由于继发感染了其它的一些细菌或者病毒而引起的；与此同时，猪不仅可感染人流感病毒，还可感染禽流感病毒，作为流感病毒种间传播的中间宿主，具有重要的公共卫生学意义。　　 本研究采用纯化的H3N2亚型SIV A/Swine/Guangdong/9/05（H3N2）（以下简称SW/GD/9/05）免疫6 周龄BALB/c 雌性小鼠，加强免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0 融合。采用血凝抑制（HI）和ELISA 方法筛选阳性细胞克隆，连续多次克隆培养后，获得7 株亲和力较高抗H3 亚型血凝素（HA）的单克隆抗体（McAb），分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12，用其制备的腹水ELISA 效价分别为1: 105、1: 106、1: 104、1: 105、1: 106、1: 105、1: 106；特异性试验表明7 株单抗均不与其他亚型SIV 和其他猪病病毒发生交叉性反应。1C9、2C5、2F10、3D3单抗亚类为IgG1，而4E8、5C7、5D12 则是IgG2a，所有的单抗轻链均为κ型。　　 Western-blot 结果显示，这7株单抗都能识别HA蛋白，均能分泌针对血凝素的抗体。　　 将本实验室构建的pCAGGS-H3HA质粒转染到293T 细胞后，分别用7 株单抗进行间接免疫荧光试验，能观察到特异性绿色荧光，证实该7 株单抗具有良好的特异性。　　 从已有的7株H3亚型单克隆抗体中取出一株（4E8）用辛酸－硫酸胺联合沉淀法进行纯化，通过对ELISA 反应各个工作条件的优化，建立了以多抗作为包被抗体，单抗作为二抗的抗原捕捉ELISA方法。相关试剂最佳工作浓度分别为：血清1:8000倍稀释，单抗0.5μg/孔，酶标抗体1:5000稀释；最佳反应条件分别为：单抗37℃作用1.0h，酶标抗体37℃作用1.0h，底物室温作用10min；最佳封闭液选择为5％脱脂乳－PBS稀释液。交叉性试验结果显示该方法与H1、H5、H9 亚型SIV 及其它猪病病毒均无交叉反应，具有较好的特异性；批内、批间重复试验变异系数均小于10％，重复性好；敏感性试验结果显示，该方法对纯化的H3 亚型SIV 最低检出量为3.11ng。　　 最后，应用建立的抗原捕捉ELISA方法对72份H3亚型SIV实验室感染SPF鸡的拭子和肺脏样品进行检测，并同时进行病毒分离，结果两种方法的检测符合率为90.28％。表明应用单抗所建立的抗原捕捉ELISA检测方法具有特异、敏感、快速的优点，可用于H3 亚型SIV的临床检测。