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本实验通过比较金黄地鼠在不同配方高脂饲料喂养下血脂的变化情况,寻找最佳高脂饲料配方,用以塑造稳定的、具有高甘油三酯血症特征的高脂血症模型,运用分子生物学技术探讨该模型TG代谢紊乱形成的分子机制;应用金黄地鼠高脂血症模型,评价LRTG的降脂作用,从分子水平上探讨降TG作用的机制,对有效降甘油三酯药物的开发提供科学依据。金黄地鼠随机分为正常组、模型一组和模型二组,正常组饲喂常规饲料,两个模型组分别饲喂不同配方的高脂饲料,连续诱导4周,每周测定动物体重,摄食量,血脂水平(TG、TC、LDL-C和HDL-C),4周后取肝脏测定肝脂(TG、TC)含量,采用荧光实时定量PCR技术检测肝脏 AMPK,SREBP-1c,ACC,SCD-1,CPT-1,PPARα,AGPAT2,DGAT2,MTTP,ApoB和LPL mRNA的相对表达变化金黄地鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(fenofibrate 0.15g/kg)、LRTG高(1.2g/kg)、中(0.6g/kg)、低(0.3g/kg)剂量组。正常组饲喂常规饲料,模型及各给药组饲喂高脂饲料,建立高脂血症模型,造模1周后,酶法检测血脂水平(TC、TG、LDL-C、FFA),在高脂血症模型成立的基础上开始给药,各组按剂量灌胃给药,模型组和对照组灌胃等体积蒸馏水,连续给药3周后,测定血脂水平(TG、TC、LDL-C、FFA)、肝脂(TG,TC)水平、血浆LPL和肝脏HL的活性;运用实时定量PCR技术对TG代谢通路的关键基因进行筛选,Western blot法检测肝脏AMPK,Phospho-AMPK,SREBP-1 c,Phospho-SREBP-1 c的蛋白表达情况。实验结果表明,金黄地鼠经高脂饲料诱导4周,模型一组于造模一周后TG、TC、LDL-C即开始升高并维持至实验结束;而模型二组高脂饲料配方不足以形成稳定的高甘油三酯血症病变;TG代谢紊乱机制研究表明,金黄地鼠在高脂饲料的诱导下,肝脏AMPK表达下调,对SREBP-1c的磷酸化作用减弱,促进SREBP-1c及其下游的靶基因ACC、SCD-1的表达,肝脏脂肪酸合成增多;同时,PPARα表达下调,使下游靶酶CPT-1活性下降,脂肪酸β-氧化作用降低;AGPAT2,DGAT2基因表达上调,促进了肝脏中TG的合成;这些因素共同作用引起TG代谢紊乱。LRTG降脂作用结果表明,给药3周后,阳性药非诺贝特和LRTG均可明显降低动物体重、血脂和肝脂水平,对血清TG的异常升高有较强的抑制作用。LRTG降TG作用机制研究表明,LRTG通过上调AMPK的基因表达,促进AMPK对SREBP-1c的磷酸化作用,降低了SREBP-1c及其下游靶分子SCD-1、GPAT、DGAT2的活性,最终使肝脏脂肪酸和TG合成减少;LRTG还可抑制AGPAT2活性,进一步降低TG的合成;LRTG还可降低ApoCⅢ对LPL的抑制作用,LPL活性升高,促进TG的分解。因此,LRTG是一种新型的降甘油三酯新药。