【摘 要】
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[目的]放射治疗肿瘤已成为各种恶性肿瘤的重要治疗方法,特别是对手术不能切除的肿瘤更是首选方法。内照射治疗使放射性同位素高度浓集于肿瘤局部,比外照射治疗给予肿瘤细胞的辐射剂量大,在杀灭肿瘤细胞或减慢肿瘤生长中起到非常重要的作用。由于制造工艺的改进,32P-玻璃微球稳定性有了很大提高,近几年在治疗肿瘤中应用日益广泛。但是,32P-玻璃微球在杀死癌细胞的同时,也与其接触的正常细胞发生作用,对正常机体的免
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[目的]
放射治疗肿瘤已成为各种恶性肿瘤的重要治疗方法,特别是对手术不能切除的肿瘤更是首选方法。内照射治疗使放射性同位素高度浓集于肿瘤局部,比外照射治疗给予肿瘤细胞的辐射剂量大,在杀灭肿瘤细胞或减慢肿瘤生长中起到非常重要的作用。由于制造工艺的改进,32P-玻璃微球稳定性有了很大提高,近几年在治疗肿瘤中应用日益广泛。但是,32P-玻璃微球在杀死癌细胞的同时,也与其接触的正常细胞发生作用,对正常机体的免疫功能、造血系统和其它组织产生不同程度的损伤,使肿瘤患者出现一系列不良反应,导致内放射治疗难以进行。所以,预防和减轻内放射治疗引起的各种毒副作用,保证内放射治疗的顺利进行,已成为肿瘤内放射治疗十分重要的课题。半叶马尾藻多糖为天然生理活性物质,具有毒性小、药源丰富和作用广泛的特点,不仅有提高免疫功能、增强造血能力和抗肿瘤作用,而且具有清除自由基和减少脂质过氧化的抗辐射功能。本课题选用半叶马尾藻提取多糖,通过32P-玻璃微球肿瘤内多点注射辐射损伤小鼠模型,筛选具有减毒增效作用的海藻多糖组份,为开发海藻多糖提供实验资料。
[方法]
1.半叶马尾藻多糖的提取、纯化、分离和鉴定(1)用水煮醇沉淀法提取半叶马尾藻多糖(2)蛋白酶联合Sevage法去蛋白纯化半叶马尾藻多糖(3)凝胶过滤柱层析分离半叶马尾藻纯多糖的不同组份(4)通过理化实验、凝胶过滤柱层析、紫外光谱扫描、溴化钾压片红外光谱测定和薄层层析等方法分析多糖的纯度、理化性质、分子结构和单糖组成。
2.32P-玻璃微球对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响(1)小鼠S180实体瘤模型的建立(2)32P-玻璃微球肿瘤内多点注射辐射损伤小鼠模型的建立(3)称重法检测32P-玻璃微球对S180肉瘤小鼠的抑瘤率(4)处死小鼠时,记录其腹水量、腹水性状、腹水瘤密度、脾脏病变和其他脏器变化。(5)3H-TdR掺入法检测32P-玻璃微球对S180肉瘤小鼠胸腺细胞DNA合成的影响(6)脾淋巴细胞转化实验检测32P-玻璃微球对S180肉瘤小鼠淋巴细胞转化功能的影响(7)脾细胞增殖法检测脾细胞产生IL-2的能力(8)酶释放法检测NK细胞杀伤靶细胞的能力
3.半叶马尾藻多糖对32P-玻璃微球肿瘤内照射小鼠的减毒增效作用(1)3H-TdR掺入法检测辐射损伤小鼠胸腺细胞DNA合成的变化(2)流式细胞术检测小鼠血细胞表面CD3、CD4、CD8的表达(3)ELISA法检测脾淋巴细胞产生IFN-γ),和IL-2的能力(4)酶释放法检测NK细胞杀伤靶细胞的能力(5)分光光度法检测血清溶血素
[结果]
1.半叶马尾藻多糖的提取和鉴定对半叶马尾藻采用水煮乙醇沉淀法粗提,蛋白酶联合Sevage法去蛋白,凝胶过滤柱层析进一步纯化后得到SHP,通过紫外、红外扫描、薄层层析等进行纯度和结构鉴定及分子量测定。结果表明SHP的提取率为8.56%,总糖含量为90.96%,提取纯化的半叶马尾藻多糖(SHP)是均一组分,纯度高。含有甘露糖糖醛酸,平均分子量为4.373×104,并且含有吡喃多糖、木聚糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖和果糖等单糖。
2.32P-玻璃微球内照射实验对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响(1)1x106个瘤细胞作为肿瘤模型的瘤细胞接种量,小鼠存活时间长,相对稳定,利于对试验鼠免疫和病理学变化作动态监测。(2)荷瘤鼠在接种肿瘤细胞后各脏器均发生变化,尤其是脾脏和胸腺等免疫器官变化更为明显。第4天脾脏显著增大,第8天脾脏显暗红色,并且发生萎缩。(3)3H-TdR掺入结果表明,小鼠接受55.5 MBq以上剂量照射后,胸腺和脾细胞功能明显降低,胸腺和脾脏指数、胸腺细胞自发增殖能力、小鼠脾淋巴细胞对ConA和LPS的反应均随辐射剂量的增大而减弱。(4)小鼠接受55.5 MBq以上剂量照射后,脾淋巴细胞产生IL-2能力和NK细胞功能明显受损。
3.半叶马尾藻多糖对32p-玻璃微球内照射小鼠的减毒增效作用(1)3H-TdR掺入结果表明,SHP可以促进辐射损伤小鼠胸腺细胞DNA合成(2)SHP可以拮抗辐射引起的血细胞表面抗原(CD3、CD4、CD8)减少(3)SHP可以提高脾细胞产生IFN-γ和IL-2的能力,提高血清溶血素的浓度(4)SHP可以增强NK细胞杀伤靶细胞的能力
[结论]
1.从半叶马尾藻中成功提取具有免疫活性的多糖。
2.高剂量的32P-GMS对肿瘤细胞有很强的杀伤作用,但同时也产生了免疫功能的抑制。
3.半叶马尾藻多糖对32P-GMS辐射损伤小鼠免疫功能具有明显的减毒增效作用。
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