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糖尿病肾病(DN)属中医消渴肾病,是糖尿病(DM)重要的微血管并发症,是导致慢性肾功能不全的主要原因,目前 DN 已跃升为终末期肾病(ESRD)的首位原因,占35%左右。本论文从文献综述、理论探讨、实验研究等方面对解毒通络保肾胶囊防治 DN进行较系统的研究。重点探讨毒损肾络病机理论与 DN 炎症发病机制的相关性,论述解毒通络保肾胶囊通过干预 DN 炎症机制发挥治疗上的优势,进一步从不同的角度阐述解毒通络保肾法的科学性,实验研究通过运用中药抑制炎症因子表达途径,进一步阐明 DN的发病机理,有较强的创新性和实用性。 1 文献综述 1.1 中医药研究糖尿病肾病进展 从古代和现代中医对 DN 病名的认识、病因病机的探索、辨证论治进展情况及中医药防治 DN 作用机制进展等方面进行了综述,并对当前在诊断及疗效评定标准、辨证分型和科研等方面存在的缺乏规范性研究等问题进行了述评和展望。 1.2 糖尿病肾病炎症发病机制的研究进展 就近年来国内外在 DN 炎症发病机制中,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、核因子(NF-κB)、血管紧张素II(AngII)相关炎症因子作用机制的最新研究成果及三者间的关系、研究动态进行了综述。 2 理论探讨 运用中医理论引经据典,并结合现代研究成果,对消渴肾病的病机理论、治则治法等进行了探讨,提出并完善毒损肾络是消渴肾病的发病关键,阐明毒损肾络理论与 DN炎症发病机制的相关性,论述了解毒通络保肾法通过干预 DN 炎症发病机制,为消渴肾病的研究思路及治法提供理论依据。 3 实验研究 3.1 解毒通络保肾胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏功能的影响 采用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠实验性 DM 模型,设正常对照组、DM 模型组、阳性对照组(DM+苯那普利)和中药实验组(DM+解毒通络保肾胶囊),实验观察各项指标。结果表明,解毒通络肾胶囊明显改善 DM 大鼠的一般状态,具有一定的降血糖作用,并具有降低血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL),提高高密度脂蛋白(HDL-C)而调节脂代谢的作用,与 DM 模型组比较有显著性统计学意义(P<0.01,P<0.05);能够抑制 DM 大鼠早期肾脏肥大及肾小球高滤过;降低 DM 大鼠升高的血清尿素氮、肌酐,内生肌酐清除率,与 DM 模型组比较有显著性统计学意义(P<0.05,P<0.01);显著降低实验性 DM 大鼠 24h 尿蛋白排泄量和尿白蛋白排泄率(UAER),与 DM 模型组比较有显著性统计学意义(P<0.01)。提示解毒通络保肾胶囊对实验性 DM 大鼠具有良好的调节糖脂代谢作用,并具有抑制肾小球高滤过和肾脏肥大、减少尿蛋白排出、保护肾功能的作用。尤其在降血糖和尿蛋白方面疗效优于阳性对照组。 解毒通络保肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏炎症机制的干预研究223.2 解毒通络保肾胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏形态学的影响本实验通过光镜、电镜观察各组实验性 DM 大鼠肾组织形态学变化,利用免疫组化观察解毒通络保肾胶囊对 DM 大鼠肾小球增殖细胞核抗原(PCNA)及系膜区细胞外基质(ECM)的主要成分 IV 型胶原(Col IV)和纤维连接蛋白(FN)沉积的影响,结果表明:DM 模型组光镜下可见肾小球系膜区弥漫性增宽,PAS 阳性的均质蛋白性物质明显增多,肾小球 ECM 增多,系膜细胞(MC)轻度增生,肾小球基底膜(GBM)增厚等表现,透射电镜观察结果为肾小球基底膜呈阶段性增厚,有的模糊不清,上皮足突数量减少、广泛融合或部分融合,滤过膜间隙增大,系膜区扩大,MC 增多,足细胞胞质内线粒体肿胀,内皮细胞增生。经解毒通络保肾胶囊治疗的中药实验组上述病理改变较 DM模型组显著减轻。免疫组化结果表明,DM 模型组表达 PCNA 的阳性细胞核免疫染色从强度到面积都明显增加,可达正常对照组的 3 倍以上,经解毒通络保肾胶囊治疗的中药实验组 PCNA 表达明显减轻;DM 模型组 Col IV 与 FN 免疫染色从强度到面积都明显增加,可达正常对照组的 5 倍以上,且其染色浓重的区域通常与细胞增生区域有关。解毒通络保肾胶囊治疗的中药实验组Col IV及FN在肾小球内表达从染色到面积均明显减轻。提示解毒通络保肾胶囊能明显改善实验性 DM 大鼠肾组织的病理变化,对 DM 肾脏具有保护作用,抑制 DM 大鼠肾小球 MC 增殖及 ECM 的合成,减轻积聚,改善 DM 肾小球硬化。3.3 解毒通络保肾胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏 AngII 及 NF-κB 途径的影响本实验采用放射免疫法检测各组实验动物肾组织中 AngII 含量。结果表明:DM 模型组肾组织AngII 含量明显增加,与正常对照组比较有显著的差异(P<0.01),解毒通络保肾胶囊治疗的中药实验组及苯那普利治疗的阳性对照组 DM 大鼠肾组织中 AngII 含量较 DM 模型组明显下降(P<0.01),提示解毒通络保肾胶囊具有减少肾组织中 AngII 含量的作用。免疫组化检测各组实验大鼠肾脏 NF-κB 表达,观察解毒通络保肾胶囊对实验性DM 大鼠肾脏 NF-κB 蛋白表达的影响,目的是探讨解毒通络保肾胶囊防治 DN 的分子机制。结果表明:DM 模型组大鼠 NF-κB 蛋白表达在肾小球细胞核中呈高水平表达,免疫染色从强度到面积都明显增加,可达正常对照组的 8 倍以上,解毒通络保肾胶囊治疗的中药实验组和苯那普利治疗的阳性药对照组大鼠肾小球中NF-κB 表达阳性细胞数目显著低于 DM 模型组,表明解毒通