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云斑尖塘鳢（Oxyeleotris marmorata）,又名泰国笋壳鱼,为塘鳢科尖塘鳢属的一种名优养殖鱼类。随着其养殖规模的扩大,云斑尖塘鳢疾病越来越严重,其中云斑尖塘鳢虹彩病毒（Marbled sleepy goby iridovirus,MSGIV）和弹状病毒（Oxyeleotris marmoratus rhabdovirus,OMBRV）是危害其养殖产业的重要病原,且这2种病毒在养殖生产中常混合感染。目前针对云斑尖塘鳢疾病主要依赖抗生素和化学药物,容易导致药物残留及耐药菌株出现,给食品安全及人类健康带来严重威胁。而疫苗免疫是预防病毒病最经济有效手段,但针对云斑尖塘鳢的疫苗未见报道。因此,本论文以分离自云斑尖塘鳢的MSGIV和OMBRV制备出二联灭活疫苗,采用RNA-sequencing技术分析了该疫苗诱导云斑尖塘鳢脾脏差异表达基因及其信号通路,并进一步采用qPCR方法研究了免疫相关基因表达变化,为阐明疫苗诱导云斑尖塘鳢免疫应答机制奠定基础。取得的主要结果如下:1.虹彩病毒、弹状病毒二联灭活疫苗制备及免疫保护效果。以对MSGIV和OMBRV均敏感的鳜脑细胞（Chinese perch brain cell line,CPB）为扩增体系,将分离自患病云斑尖塘鳢的MSGIV和OMBRV分别接种CPB细胞,待完全病变后测得病毒滴度分别为107.35TCID50/ml和1010.68TCID50/ml;将收获的病毒液采用0.2%甲醛灭活,通过细胞盲传法和鱼体安全实验检测证明病毒灭活完全;将2种病毒灭活液等量混合,然后与IMS1312佐剂按1:1（体积比）乳化制备出虹彩病毒、弹状病毒二联灭活疫苗;安全性试验结果表明制备的疫苗接种云斑尖塘鳢后鱼体活动正常,无临床不良反应,观察14d未见鱼体死亡,证明该疫苗是安全的;疫苗接种云斑尖塘鳢后28d采用MSGIV和OMBRV强毒株进行攻击,观察14d,攻毒后免疫组鱼未表现出临床发病症状,成活率100%,MSGIV攻毒后对照组第5d开始出现死亡,累计死亡率为90%,OMBRV攻击后对照组第1d开始出现死亡,累计死亡率为100%,死亡个体表现出MSGIV或OMBRV感染典型症状,PCR检测为MSGIV或OMBRV阳性,经计算该二联灭活疫苗针对MSGIV和OMBRV的相对免疫保护率（Relative percent survival,RPS）均为100%。2.云斑尖塘鳢接种疫苗后及攻毒后脾脏转录组分析。分别构建疫苗接种后7d、14d以及免疫攻毒后48h、7d云斑尖塘鳢脾脏cDNA文库并对其进行高通量测序,共获得85547条unigenes,其中32386条unigenes被注释。疫苗接种后脾脏cDNA文库共筛选得到13593个差异表达基因,其中疫苗接种后7d上调基因1291个、下调基因2030个,14d上调基因3732个、下调基因6540个。MSGIV和OMBRV攻毒后脾脏cDNA文库分别筛选到15658和13982个差异表达基因,其中MSGIV攻毒后48h上调基因8073个、下调基因5595个,攻毒后7d上调基因5110个,下调基因10371个;OMBRV攻毒后48h上调基因3797个,下调基因5846个,攻毒后7d上调基因10025个,下调基因3704个。GO功能注释及KEGG分析显示,差异表达的免疫相关基因主要富集于细胞和细胞因子通路、吞噬细胞通路等。疫苗接种及攻毒后云斑尖塘鳢脾脏转录组结果为阐明疫苗诱导免疫应答机制提供背景资料。3.疫苗接种及攻毒后云斑尖塘鳢免疫应答相关基因表达分析。在转录组筛选出免疫相关差异表达基因的基础上,重点针对Toll样受体通路、抗原呈递以及抗体产生等通路挑选出9个基因,采用qPCR方法对这些基因的表达情况进行了研究,结果表明,疫苗接种后MHC I基因表达显著上调,7d和14d分别上调2.67倍（p<0.05）和1.676倍（p<0.05）,而MHC II基因表达无显著变化,表明抗原主要通过MHC I分子递呈。免疫后攻毒TCR、IgM基因表达显著上调,其中MSGIV攻毒后48h分别上调10.1倍（p<0.01）和6.8倍（p<0.01）;OMBRV攻毒后48h分别上调6.3倍（p<0.05）和9.8倍（p<0.01）,表明细胞免疫和体液免疫均在疫苗诱导免疫保护中发挥了重要作用。除此之外,Toll样受体通路的TLR9基因在MSGIV攻毒后48h和7d表达水平分别上调7.9倍（p<0.01）和4.7倍（p<0.05）;而TLR7基因在OMBRV攻毒后48h和7d表达水平分别上调5.7倍（p<0.05）和2.6倍（p<0.05）,TLR8表达水平分别上调10.5倍（p<0.01）和6.8倍（p<0.01）,表明2种病毒可能诱导了不同的先天性免疫应答。