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汞及其化合物都是具有很高毒性的污染物,可以对胚胎发育、细胞化学活性和组织病理学方面造成影响。环境中的汞可以在微生物的作用下转化成为有机汞,然后通过食物链富集最终进入人体。虽然自水俣病爆发后对汞的毒性的研究已经被广泛开展,但是到目前为止,汞在生物体内吸收、富集和转化的途径以及汞的毒性机理尚不十分清楚。本文主要对生物体内与汞结合的生物分子进行了研究。
对从中国贵州汞矿附近采集的生大米样品和煮熟后的大米样品分别用胰蛋白酶进行酶解,用高效液相色谱(HPLC)-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用系统对其中与生物小分子相结合的甲基汞进行了形态分析。分析结果表明生的大米样品中的甲基汞主要以甲基汞半胱氨酸(CH3HgCys)的形式存在,它的形成往往被认为是甲基汞可以穿越血脑屏障和胎盘屏障的主要原因。虽然大米的烹饪过程不会改变大米中的总汞含量或者甲基汞的总量,但是在煮熟的大米中没有检出甲基汞半胱氨酸(CH3HgCys),说明在大米烹饪的过程中绝大部分的甲基汞半胱氨酸(CH3HgCys)会降解成为其他形式的甲基汞化合物,降解产物的结构和毒性还有待进一步研究。
分别用无机汞和甲基汞对Medaka进行暴露,然后利用高效液相色谱(HPLC)-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用技术对Medaka肝脏和脑组织中的水溶性汞结合蛋白进行分析。与空白组相比,暴露组Medalka的肝脏和脑组织中都富集了大量的汞,并且甲基汞暴露后与无机汞暴露后汞在Medaka肝脏和脑组织蛋白上的分布形式存在一定差异。同时我们还发现不同形态汞暴露后,Medaka肝脏和脑组织提取液中铜和锌的含量都有所下降。为了进一步研究甲基汞对Medaka的毒性机理,我们对低剂量甲基汞暴露后的Medaka肝脏中的水溶性汞结合蛋白进行了研究。采用HPLC-ICP-MS联用系统,我们成功纯化出两种汞结合蛋白,其中一种被鉴定为转铁蛋白,另外一种被鉴定为金属硫蛋白的二聚体。
通过排阻色谱(SEC)-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用技术,发现人血浆中主要含有两种水溶性汞结合蛋白。利用二维色谱技术(2D-HPLC)对其进行分离纯化后,用高效液相色谱(HPLC)-线性离子阱-傅立叶变换离子回旋共振质谱(LTQ-FT-MS)进行结构鉴定。蛋白质数据库搜索的结果表明这两种汞结合蛋白分别是α2巨球蛋白和人血清白蛋白。对两种水溶性汞结合蛋白上的汞进行定量分析,结果表明血浆样品中的汞主要结合在人血清白蛋白上。