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结核病是一种在世界范围广泛传染的疾病,全球约有三分之一的人患有潜伏性结核病。结核分枝杆菌是该疾病的主要致病菌,其能够在宿主体内共存的潜伏性是结核病难以被根治的原因之一。结核分枝杆菌具有11种真核细胞样丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,仅2种蛋白激酶为分泌蛋白,PknG是其中的一种具有重要功能的蛋白激酶且是一种分泌蛋白。PknG能够调节细菌在体内的生存环境并且可以阻碍吞噬体与溶酶体相融合的过程,从而使得结核分枝杆菌不被巨噬细胞清除而继续存活于宿主体内。尽管PknG对结核分枝杆菌的生存有重要作用,但是它在宿主体内的信号通路及生理影响仍不清楚。为了更好地研究结核分枝杆菌蛋白激酶G在宿主中的功能和相互作用的蛋白,本研究基于由19191个蛋白构成的人类蛋白质组芯片进行全局性反应并发现了38个与PknG存在相互作用的蛋白。通过生物信息学分析发现这些相互作用的蛋白参与的生理过程包括蛋白折叠、物质转运、碳水化合物合成及信号转导等。不仅如此,由人类蛋白质组芯片检测结果显示PknG与人类亲环蛋白PPIA存在着明显的相互作用。人类PPIA蛋白在与炎症相关的疾病中发挥着重要的调控功能,它在炎症中的过表达能够激活NF-κB及ERK1/2通路并进一步促进炎症的应答。本研究通过生物膜干涉技术,免疫共沉淀反应及质谱鉴定蛋白磷酸化位点的方法验证了PknG与PPIA蛋白的相互作用并且PknG能够在体外将PPIA Thr107位点磷酸化。另外,通过细胞学实验发现PknG在HEK293T细胞中能够显著降低PPIA蛋白的表达水平,同时,PknG对PPIA蛋白表达的下调能够抑制其对NF-κB和ERK1/2通路的激活。为了进一步探究PPIA蛋白对结核分枝杆菌在巨噬细胞中生存的影响,本研究用慢病毒转染方法在人类单核细胞THP-1中过表达PPIA并进行耻垢分枝杆菌的侵染实验,结果显示PPIA蛋白的过表达导致THP-1的细胞因子TNF-α,IL-4 mRNA水平上调且在一定程度上影响了过表达PknG的耻垢分枝杆菌在巨噬细胞中的生存。由此,本研究发现PknG与PPIA蛋白存在着相互作用并且PknG能够下调PPIA在细胞中的表达水平,该过程有助于抑制细胞NF-κB和ERK1/2炎症通路的激活,进而有助于结核分枝杆菌在巨噬细胞中的生存。