【摘 要】
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目的:依托泊苷对不同肺癌具有致死敏感选择性,即对小细胞肺癌敏感,而对NSCLC极不敏感。铁死亡是近些年发现的一种新的程序性死亡方式,其特征是脂质过氧化。依托泊苷能够促进非小细胞肺癌（NSCLC）细胞代谢重编程生成乳酸,而乳酸与癌症的多种生物学功能相关。乳酸与铁死亡的关系,以及依托泊苷是否通过乳酸调控铁死亡仍不清楚。因此,本文主要探究NSCLC细胞代谢重塑生成的乳酸与铁死亡的关系和在其依托泊苷耐药的
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目的:依托泊苷对不同肺癌具有致死敏感选择性,即对小细胞肺癌敏感,而对NSCLC极不敏感。铁死亡是近些年发现的一种新的程序性死亡方式,其特征是脂质过氧化。依托泊苷能够促进非小细胞肺癌（NSCLC）细胞代谢重编程生成乳酸,而乳酸与癌症的多种生物学功能相关。乳酸与铁死亡的关系,以及依托泊苷是否通过乳酸调控铁死亡仍不清楚。因此,本文主要探究NSCLC细胞代谢重塑生成的乳酸与铁死亡的关系和在其依托泊苷耐药的作用和分子机制。材料与方法:选择人源肺癌细胞H1299、A549、H446和H1688作为研究对象。（1）应用MTT法检测不同肺癌细胞系对依托泊苷的敏感性;（2）通过MTT实验探究铁死亡抑制剂是否对不同肺癌细胞系的依托泊苷致死性有抑制作用;（3）应用铁离子试剂盒和脂质活性氧探针分别检测不同肺癌细胞对依托泊苷处理后的胞内铁离子浓度和脂质活性氧水平;（4）应用WB法探究依托泊苷对GPX4蛋白表达的影响;（5）利用MTT法检测操纵GPX4的表达是否影响依托泊苷的敏感性;（6）通过q PCR技术和双荧光素酶报告基因技术探究依托泊苷是否从转录水平调控GPX4的表达;（7）应用IP实验和过表达联合敲降实验检测NEDD4L参与调控GPX4的表达;（8）通过WB实验和敲降实验,检测乳酸是否参与介导GPX4的表达;（9）通过q PCR技术和双荧光素酶报告基因技术探究乳酸是否从转录水平上调控GPX4;（10）应用WB技术探究乳酸通过何种通路调控GPX4的表达。结果:（1）MTT结果表明,依托泊苷对SCLC的敏感性高于NSCLC;（2）MTT结果表明,在SCLC细胞中,铁死亡抑制剂能缓解依托泊苷诱导的细胞死亡;（3）铁离子检测和活性氧探针检测发现,依托泊苷上调SCLC细胞中铁离子含量和脂质活性氧水平;下调NSCLC细胞中铁离子含量,对脂质活性氧水平没有影响;（4）WB实验证明,依托泊苷能够上调NSCLC细胞中GPX4蛋白的表达,下调SCLC细胞中GPX4蛋白的表达;（5）MTT实验表明,GPX4的表达会影响依托泊苷的敏感性;（6）q PCR技术和双荧光素酶报告基因技术证明,依托泊苷对GPX4的转录水平没有影响;（7）IP和WB实验结果表明,依托泊苷通过SGK1-NEDD4L通路调控GPX4的表达;（8）WB实验证明,依托泊苷促进NSCLC细胞代谢重编程生成的乳酸参与了GPX4的调控;（9）q PCR技术和双荧光素酶报告基因技术证明,乳酸在转录水平上对GPX4的转录水平没有影响;（10）WB技术证明,乳酸通过p38-SGK1-NEDD4L通路调控GPX4的表达。结论:（1）依托泊苷既能促进小细胞肺癌细胞凋亡,也能诱导其铁死亡,而对NSCLC细胞只有凋亡效应。（2）乳酸通过上调GPX4导致NSCLC细胞铁死亡抗性而使其对依托泊苷耐药。（3）依托泊苷通过乳酸调控p38-SGK1-NEDD4L通路来上调GPX4的表达。
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