【摘 要】
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人肠道病毒71型（Human Enterovirus 71,HEV71）是可引发人类手足口病（Hand,foot and mouth disease,HFMD）的主要病原体之一。易感群体为5岁以下儿童,部分儿童会出现较为严重的呼吸困难、并伴有神经系统以及循环系统的并发症,甚至出现死亡现象。目前,尚无对症治疗EV71引起的手足口病的药物,通常的治疗方式以支持性治疗为主,而接种预防性疫苗是预防EV71
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人肠道病毒71型（Human Enterovirus 71,HEV71）是可引发人类手足口病（Hand,foot and mouth disease,HFMD）的主要病原体之一。易感群体为5岁以下儿童,部分儿童会出现较为严重的呼吸困难、并伴有神经系统以及循环系统的并发症,甚至出现死亡现象。目前,尚无对症治疗EV71引起的手足口病的药物,通常的治疗方式以支持性治疗为主,而接种预防性疫苗是预防EV71感染的有效手段。目前我国有3种EV71灭活疫苗上市,还没有病毒样颗粒（VLPs）疫苗面世,由于VLPs独特的安全性及免疫原性,以及开发EV71相关联合疫苗的需求,使EV71 VLPs疫苗成为研制热点。本研究旨在建立一个用于检测昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备的EV71 VLPs（IB-EV71 VLPs）的检测方法,以满足IB-EV71 VLPs疫苗开发过程中检测抗原含量的要求。用IB-EV71 VLPs免疫日本大耳白兔,获得抗体效价大于1:100000的血清,经亲和层析纯化,获得多克隆抗体。使用该多克隆抗体和HRP标记的抗EV71 P1抗体初步建立了双抗体夹心ELISA法来检测IB-EV71 VLPs,筛选最佳的包被浓度以及酶标抗体的稀释倍数;并根据方法学验证相关要求,对该方法进行了专属性、线性、范围、准确度、定量限及精密度的初步评价研究。结果显示:建立的方法专属性良好;在25～400ng/ml范围内,线性关系良好,R~2值大于0.99;检测范围内的回收率在86%～116%之间;定量限为2ng/ml;板内精密度和板间精密度的相对标准偏差（RSD）值均小于15%。综上所述,本研究建立了双抗体夹心ELISA法用于检测IB-EV71 VLPs。该方法专属性、线性、范围、准确度、精密度等均较好,定量限为2ng/ml,符合生物分析方法学验证指导原则的基本要求,为IB-EV71 VLPs疫苗的开发与质量控制奠定了基础。
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