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【研究背景】变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)是机体接触变应原后,由免疫球蛋白E(Immunoglobulin E,IgE)介导的鼻粘膜变态反应性疾病。尽管IgE在AR发生和发展中的核心作用已被广泛证实,但是IgE异常产生的调控机制至今仍不明确。传统观点认为IgE的产生主要受到2型辅助性T(Type 2 helper T,Th2)细胞和调节性T(regulatory T,Treg)细胞的调控。直到最近,基于大量动物和人体实验的证据,人们才意识到位于生发中心的滤泡辅助性T(Follicular helper T,Tfh)和滤泡调节性T(Follicular regulatory T,Tfr)细胞才是真正调控B细胞产生免疫球蛋白的T细胞亚群。然而,Tfh和Tfr细胞在变应性疾病的作用,尤其是对IgE产生的调控,并未完全明晰。另外,Tfh细胞和Tfr细胞在抗原特异性免疫治疗(Allergen immunotherapy,AIT)中的作用迄今完全不清楚。【研究目的】(1)建立外周血Tfr细胞与扁桃体Tfr细胞的联系;(2)明确AR患者外周血Tfh和Tfr细胞的表型和数量;(3)阐明AR患者Tfh和Tfr细胞的功能,重点关注IgE的产生;(4)明晰AR患者Tfh和Tfr细胞与抗原特异性IgE的相关性;(5)明确AR患者Tfh和Tfr细胞与疾病严重程度的相关性;(6)探索Tfh和Tfr细胞在AIT中的作用。【研究方法】(1)免疫组织化学染色观察扁桃体Tfr细胞的位置和数量;(2)流式细胞术全面检测扁桃体和/或外周血Tfh和Tfr细胞的表型和数量;(3)体外与B细胞共培养探讨Tfh细胞的功能;体外与Tfh和B细胞共培养探讨Tfr细胞的功能;(4)记录AR患者症状评分和血清抗原特异性IgE水平,分析它们与T细胞亚群的相关性;(5)记录AIT前后(治疗前,治疗后3个月、6个月、12个月)AR患者症状与药物综合评分(Combined symptom and medication score,CSMS)、外周血辅助性T细胞亚群比例和血清免疫球蛋白水平;(6)分析AIT治疗前后T细胞亚群的改变与AIT疗效的相关性。【实验结果】(1)AR患者外周血2型Tfh(Type 2 Tfh,Tfh2)细胞,而不是对应的2型非Tfh(non-Tfh)细胞,较正常人显著增多;(2)Tfh2细胞通过分泌IL-4促进AR中IgE的产生;(3)屋尘螨过敏AR患者血清中Dermatophagoides pteronyssinus(Der p)特异性IgE的水平与外周血Dermatophagoides pteronyssinus group 1(Der p 1)特异性IL-4~+Tfh细胞,而不是non-Tfh细胞,的比例正相关;(4)AIT显著下调AR患者外周血Der p 1特异性IL-4~+Tfh细胞的比例,并且Der p 1特异性IL-4~+Tfh细胞比例的减少与CSMS的改善正相关;(5)Tfr细胞存在于扁桃体生发中心,然而,AR患者扁桃体生内Tfr细胞的数量较非AR患者显著下降;(6)外周血Tfr细胞的表型和数量与扁桃体中经典Tfr细胞的表型和数量正相关;(7)与正常人相比,AR患者外周血Tfr细胞,而不是CXCR5~-Treg细胞,的数量明显减少;(8)AR患者外周血Tfr细胞选择性缺失抑制IgE产生的能力,却仍保持抑制其他类型免疫球蛋白产生的功能;(9)AR患者外周血Tfr细胞比例与抗原特异性IgE水平和疾病严重程度负相关;(10)AIT显著提升AR患者外周血Tfr细胞的数量,明显改善Tfr细胞的功能;(11)AIT后Tfr细胞比例的升高与AIT的疗效正相关。【结论】(1)AR中抗原特异性IL-4~+Tfh细胞促进抗原特异性IgE的产生;(2)AIT后AR患者抗原特异性Tfh细胞比例的下降与AIT的疗效正相关;(3)AR患者功能缺陷的Tfr细胞促进IgE的产生;(4)AIT上调AR患者Tfr细胞的数量和功能,并且Tfr细胞比例的上升与AIT的疗效正相关;(5)Tfh和Tfr细胞是监测AR患者AIT疗效的潜在生物标志物。