论文部分内容阅读
目的： 化痰散结方由马钱子、半夏、天南星、三七等中药组成，是由导师杨勤建在辨证论治理论指导下，根据支气管肺癌多为痰瘀浊气互结的主要病理病机特点，经过多年临床运用优化组方而成，对支气管肺癌有较好的疗效。研究发现：化痰散结方具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。为了进一步了解化痰散结方抗肿瘤的作用分子机制，本实验运用血清药理学的方法，结合现代细胞生物学、现代分子生物学的理论知识和实验技术，在细胞分子水平上，对化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的分子机制进行探讨。 方法： ①纯种新西兰家兔10只，随机分为给药组和空白组，给药组予以7g／kg化痰散结方浸膏灌胃，空白组予以生理盐水3.5ml／kg灌胃，10天后，颈动脉采血，分离血清，灭活，冻藏。②运用高效液相法对化痰散结方中代表性成分马钱子(含士的宁)作含药血清的定性检测。③化痰散结方含药血清、不合药兔血清分别与人肺癌细胞SPC-A1共同孵育12小时、24小时、36小时、48小时后，收集细胞，醋酸缓冲液悬浮，反复冻融三次，放射免疫的方法检测人肺癌细胞内cAMP、cGMP的浓度变化。④化痰散结方含药血清、不合药兔血清分别与人肺癌细胞SPC-A1共同孵育12小时、24小时、36小时、48小时后，运用免疫组化的方法检测人肺癌细胞Fas、FasL表达的变化。⑤化痰散结方含药血清，不含药兔血清分别与人肺癌细胞SPC-A1共同孵育12小时、24小时、36小时、48小时后，运用原位杂交的方法检测人肺癌细胞TNFR1表达的变化。 结果： ①高效液相色谱图显示，士的宁和化痰散结方含药血清的保留时间相近，而与对照组的保留时间相差较大。②SPC-A1细胞内12h及24h时cAMP、cGMP浓度无明显变化，36h、48h时cAMP浓度升高，cGMP浓度无明显变化，cAMP/cGMP的比值明显升高。③免疫组化方法显示，含药组SPC-A1细胞Fas的表达明显高于对照组(P＜0.01)，而对照组SPC-A1细胞FasL的表达明显高于含药组(P＜0.05)。④原位杂交方法显示，含药组SPC-A1细胞TNFR1的表达明显高于对照组(P＜0.01)。 结论： 给药组血清中含有化痰散结方的某些成分。化痰散结方含药血清具有诱导人肺癌细胞凋亡的作用，其作用机制可能与以下有关：①升高cAMP、cAMP／cGMP的比值。②上调SPC-A1细胞Fas和下调其FasL。③上调SPC-A1细胞TNFR1。