固定化细胞酶法转化淀粉质生产海藻糖技术研究

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海藻糖是由两个葡萄糖分子构成的非还原性糖,有些生物体在恶劣的环境下,如高温、干旱、脱水、冷冻、高渗透压及有毒物质,会显示出较强的抵抗力,这与其体内存在海藻糖是密切相关的其独特的性质,使生物体的细胞,蛋白质,脂肪,碳水化合物,核酸等物质将不会受到影响,以维持细胞活力。外生海藻糖生物体和生物大分子同样能够起到良好的非特异性保护作用,因此,海藻糖被广泛应用于各行业,如食品,医药,农业,化妆品等。海藻糖是由两个葡萄糖分子构成的非还原性糖,一些生物当遭遇恶劣的环境时会表现出一定的耐受性,其内源的海藻糖会使得生物体细胞的一些活性物质保持原有结构,使得细胞仍有活性。因此,海藻糖被广泛应用于各行各业,如食品、医药、农业、化妆品等等。但由于海藻糖的制备和分离提纯比较困难,限制了它的应用。目前用于海藻糖制取的方法中,常用的是酶转化法,本研究采用海藻糖合酶酶法合成海藻糖,研究内容包括:以嗜热芽孢菌株(Bacillus thermophilic)为出发菌株,选育产生海藻糖合酶的高产菌株,进行菌株的初步鉴定,毒理测定等;产海藻糖合酶菌株的分离纯化,以及生理生化特性的测定;选择合适的固定化载体及活性基团的激活,确定细胞的固定条件,固定化细胞的催化特性及活力测定;固定化细胞连续化使用条件的优化;研究开发海藻糖的分离和提取工艺,制备出高纯度的海藻糖产品。本研究获得高效表达TreS合酶重组枯草芽孢杆菌,并成功表达海藻糖合酶,进行重组枯草芽孢杆菌摇瓶培养条件及培养基的优化,以乳糖作为诱导剂,诱导时间为对数中后期。无机氮源有利于菌体生长,对蛋白表达影响不明显,有机氮源酵母粉与蛋白胨不仅影响菌体生长而且促进蛋白表达,为后期的发酵罐培养及放大培养做好铺垫。按海藻糖合酶转化后的糖液浓度和构成进料,最佳分离效果为:海藻糖纯度87.8%,其平均质量浓度为55.1g/L;麦芽糖纯度96.8%,其平均质量为70.2g/L。
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