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第一部分小鼠脾源性内皮祖细胞培养及7.0T MR单细胞成像初探
目的:小鼠脾源性内皮祖细胞体外分离、培养;氧化铁纳米粒子Fe2O3-PLL体外标记细胞,7.0T磁共振对标记单细胞成像。
方法:密度梯度离心法分离脾脏单个核细胞,诱导培养得到EPCs,从免疫化学、荧光染色对细胞特性鉴定;Fe2O3-PLL标记细胞,普鲁士兰染色,MTT法评价Fe2O3-PLL对细胞生长的影响,邻菲哕啉法定量分析细胞内铁含量;7.0T MR不同序列体外单细胞成像。
结果:小鼠脾脏单个核细胞经体外诱导培养呈内皮细胞形态,表达EPCs表面标志物CD31、CD34、vWF,显示内吞乙酰化低密度脂蛋白(acLDL)、结合凝集素1(UEA-1)等内皮细胞的功能;Fe2O3-PLL标记对细胞增殖活力无明显影响;7.0T MR能够对磁标记单细胞成像。
结论:小鼠脾脏单个核细胞可诱导分化为EPCs;7.0T MR能够对Fe2O3-PLL标记EPCs实现体外单细胞成像。
第二部分7.0T MR对磁标记单细胞成像参数探讨
目的:7.0T MR系统对氧化铁纳米粒子标记单细胞进行体外成像,并对成像参数进行探讨。
方法:3D-FLASH序列对磁标记单细胞计数,对比梯度回波序列与自旋回波序列成像差异,对比梯度回波序列不同回波时间、不同分辨率成像差异。
结果:7.0MR能对磁标记单细胞进行成像,MR图像对细胞浓度为2×103/ml的琼脂糖模型进行细胞计数为1.7×103/ml,与实际浓度一致。2D-FLASH较SE序列对磁标记单细胞导致的T2*WI信号改变明显,差异具有统计学意义;3D-FLASH序列随TE时间延长T2*效应增强,但图像伪影逐渐明显;分辨率降低单细胞导致的信号缺失明显降低,在200μm时单细胞导致的信号波动已基本接近琼脂糖背景的内源性波动。
结论:7.0TMR系统可对氧化铁纳米粒子标记的单细胞进行探测,选择适合的序列、优化序列内参数可有效提高磁标记细胞的探测敏感性。
第三部分磁标记单细胞在肝脏分布的MR观察--对内皮祖细胞移植治疗小鼠颈动脉损伤研究的深入思考
目的:氧化铁纳米粒子Fe2O3-PLL,体外标记小鼠脾源性内皮祖细胞,经尾静脉移植至受体鼠内,7.0T MR对小鼠肝脏行离体成像。
方法:分离、诱导培养小鼠脾脏单个核细胞,Fe2O3-PLL标记细胞;制作小鼠颈动脉损伤模型,并移植标记细胞:动态监测受损颈动脉内膜改变,7.0TMR对小鼠肝脏行离体高分辨成像,并做病理切片观察。
结果:7.0T MR能动态观察到细胞向动脉内膜损伤部位归巢;7.0TMR.能够对定植于肝脏的磁标记单细胞成像。
结论:7.0T MR能够动态监测磁标记细胞活体的迁移、归巢,单细胞成像在细胞移植治疗的研究中具有极大的前景。