厚朴酚对胰腺癌细胞增殖和凋亡影响的研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:shenjin62
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研究目的:明确厚朴酚是否对胰腺癌细胞具有生长抑制作用,并探讨其相关抗癌机制。研究方法:1.体外培养胰腺癌Miapaca及PANC-1细胞,不同浓度的厚朴酚(0μg/mL-250μg/mL)分别干预24h,48h及72h后,MTT法检测厚朴酚对Miapaca及PANC-1细胞存活率的影响。2.流式细胞仪检测厚朴酚对Miapaca及PANC-1细胞凋亡率的影响。3.流式细胞仪检测厚朴酚对Miapaca及PANC-1细胞周期分布的影响4. Western-blot法检测厚朴酚对cyclinD1, p21, caspase-3, Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。5.建立PANC-1细胞裸鼠移植瘤模型,观察厚朴酚对胰腺癌的治疗效果。研究结果:1.厚朴酚对Miapaca及PANC-1细胞生存率的影响MTT检测结果显示:不同剂量厚朴酚(15,30,60,125,250μmol/L)分别作用于Miapaca及PANC-1细胞24h后,细胞活性范围为(129.35%-18.73%, PANC-1;111.79%-16.21%,Miapaca);48h后,细胞活性范围为(122.79%-13.06%, PANC-1;107.88%-10.72%, Miapaca);72h后细胞活性范围为(118.27%-10.29%, PANC-1;103.31%-9.24%, Miapaca)。低浓度(<15μmol/L)时厚朴酚可促进胰腺癌细胞的生长,高浓度(>15μmol/L)时可呈时间剂量依赖性抑制胰腺癌细胞的活性。2.厚朴酚对Miapaca及PANC-1细胞凋亡的影响流式细胞仪检测细胞凋亡变化结果显示:不同剂量厚朴酚(0,30,40,50μmol/L)分别作用于Miapaca及PANC-1细胞48h后,各组早期凋亡率分别为:PANC-1细胞(5.350.35%,8.700.28%,15.950.35%,19.650.35%),Miapaca细胞(7.200.99%,17.950.07%,38.250.35%,51.501.56%);晚期凋亡率分别为:PANC-1细胞(6.600.42%,13.950.35%,23.400.28%,26.400.42%); Miapaca细胞(11.851.20%,25.702.14%,27.701.13%,31.150.35%)。3.厚朴酚对Miapaca及PANC-1细胞周期的影响流式细胞仪检测细胞周期变化结果显示:不同剂量厚朴酚(0,30,40,50μmol/L)分别作用于Miapaca及PANC-1细胞48h后,PANC-1细胞的G1期细胞比例不断增加,分别为(56.440.71%,64.091.62%,66.991.11%,71.591.42%);G2期细胞比例减少,分别为(18.731.18%,13.280.49%,9.181.07%,5.210.37%);S期细胞比例呈上升趋势,分别为(17.641.81%,19.261.07%,20.511.33%,20.921.03%)。Miapaca细胞的G1期细胞比例不断增加,分别为(51.562.87%,60.171.64%,65.430.47%,71.570.55%);G2期细胞比例呈下降趋势,分别为(10.520.53%,9.030.35%,7.640.14%,7.030.14%),S期细胞比例减少,分别为(36.560.96%,30.531.29%,26.970.45%,20.711.06%)。4.厚朴酚对Miapaca及PANC-1细胞凋亡蛋白及周期蛋白的影响Western-blot检测显示:不同剂量厚朴酚(0,30,40,50μmol/L)分别作用于Miapaca及PANC-1细胞48h后,caspase-3表达量呈现浓度依赖性递减;Bax表达升高,而Bcl-2表达下降,Bax/Bcl-2的比值显著增大,并呈现浓度依赖性。随着magnolol浓度的增高,CyclinDl表达逐渐下降而p21表达逐渐增多,并呈现浓度依赖性。5.厚朴酚对PANC-1细胞裸鼠异种移植瘤的影响DMEM组、 Magnolol (4.5mg/kg)组和Magnolol (9mg/kg)组第21天时肿瘤的重量分别为:1.480.32g,0.990.18g,0.450.11g;体积分别为:2.540.52cm3,0.950.34cm3,0.4220.07cm3。结论:1.厚朴酚可明显抑制胰腺癌Miapaca及PANC-1细胞的生长。2.厚朴酚可诱导胰腺癌Miapaca及PANC-1细胞的凋亡,并且呈浓度依赖性,PANC-1以晚期期凋亡为主,Miapaca以早期期凋亡为主。3.厚朴酚可诱导胰腺癌Miapaca及PANC-1细胞发生G1期阻滞,并且呈浓度依赖性。4.厚朴酚可通过上调胰腺癌Miapaca及PANC-1细胞caspase-3和Bax的表达,下调Bcl-2的表达,发挥诱导细胞凋亡的作用;厚朴酚可导致CyclinDl表达下降,p21表达增多,从而导致细胞发生Gl期阻滞。5.厚朴酚可明显抑制胰腺癌在裸鼠体内的生长。
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