青风藤DNA条形码的研究及应用

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DNA条形码技术是生物分子鉴定领域的最新发展,即利用基因组中一段标准的、有足够变异的、较短同时又易扩增的DNA片段来进行物种的分子诊断。这种鉴定技术简单易于掌握,能同时鉴别种内的特异性和种间的多样性,有利于珍稀物种的保护,也利于开发新的物种。本研究主要探讨将DNA条形码技术用于青风藤(Sinomenium acutum)的分析,对其混伪品进行鉴定,建立青风藤DNA条形码的开发流程,为市场中流通的青风藤药材起到正本清源的作用。主要研究结果如下:1、通过对比CTAB法、高盐低pH法以及两种试剂盒法提取DNA,发现天根植物基因组DNA提取试剂盒为最优提取法,在此基础上对中药材DNA的提取进行了一定的优化;本实验采用通用的植物DNA条形码引物,根据文献对这些通用引物PCR条件和程序的描述,调整PCR反应的退火温度以及循环次数以便于实验的进行。2、通过对青风藤的4个候选DNA条形码片段(ITS2、psbA-trnH、natK、rbcL)进行扩增和测序,所得数据用生物信息学软件进行处理分析,按照DNA条形码筛选原则,对比4个片段的种间/种内遗传距离的界限,选择ITS2是最适合的青风藤DNA条形码片段。3、利用基于ITS2序列的DNA条形码技术对10个产地的药材进行了鉴定,成功鉴别了青风藤药材的正品以及其混伪品清风藤、鸡矢藤。虽然有些药材的加工或炮制过程对分子鉴定有影响,但DNA条形码技术可以解决大部分已经明确中药材基原的真伪问题。
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