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第一部分:肥胖相关性肾病大鼠模型的超声表现
研究背景:
随着经济的快速发展和人们生活方式的改变，肥胖人口在全球范围内急剧增长，肥胖症的流行导致肥胖相关性肾病(ORN)的发病率逐年增加。尽管该病病情进展缓慢，但仍有约1/3的ORN患者会出现进行性肾功能衰竭，最终发展为终末期肾病(ESRD)。
早期发现与干预对ORN的远期转归具有重要影响，但该病起病隐匿，早期临床症状不典型。目前ORN主要的筛查手段是通过尿常规检测尿蛋白，优点是简单易行，缺点是敏感性不高;肾活检虽然可以明确肾脏的病理损伤，但因其创伤性，大多数患者难以接受。因此，早期诊断ORN具有挑战性，目前临床亟需一种安全、便捷、敏感的检查方法用于ORN的辅助诊断。
超声是一种安全、便捷、无创且成熟的检查手段，可以敏锐地发现肾脏形态及血流灌注的变化，已被广泛用于各种肾脏疾病的诊断。它提供的信息不仅可以用于临床决策，还可以用于治疗方案的选择。肥胖引起的肾脂质异位积聚及肾小球高滤过是导致ORN发病的重要机制，二者可改变肾脏的形态及血流动力学，因此能否通过超声技术检测肾脏形态及血流的变化用于辅助诊断ORN值得深入探究。
研究目的:
采用高脂饮食建立ORN大鼠模型，利用超声技术获取大鼠肾脏二维及血流动力学参数，分析其声像图变化，筛选预测ORN的超声参数，探讨超声在辅助诊断ORN中的价值。
研究方法:
1、动物饲养及造模:4周龄的雄性SD大鼠，20只，适应性喂养两周，随机分为两组:正常饮食组(Chow组，n=8)及高脂饮食组(HFD组，n=12)。Chow组始终给予普通饲料(含10％脂肪)，喂养20周。HFD组高脂饲料(含60％脂肪)喂养8周后，根据体重增长排序，剔除下1/3大鼠，留取上2/3大鼠，继续高脂饲料喂养12周。密切观察大鼠精神，体态等一般情况的变化。
2、超声图像及数据采集:喂养至26周龄，深度麻醉大鼠，背部备皮，取俯卧位行超声检查。采集左肾二维图像，应用imageJ软件分析两组大鼠肾脏实质的回声差异。测量肾脏长径、宽径、厚径。按椭球体积公式计算大鼠左肾体积:V=π/6×长径×宽径×厚径。应用彩色多普勒超声观察肾动脉主干及肾内动脉的走行、分布及充盈状况。频谱多普勒采集肾动脉主干及叶间动脉血流频谱，测量收缩期最大流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、阻力指数(RI)。数值测量三次，取平均值，并记录。所有操作均由同名超声主治医师完成。
3、标本收集及检测:超声检查次日，将大鼠置于代谢笼中，禁食不禁水，收集24小时尿液，记录尿量。应用BA400全自动特定蛋白分析仪测定24小时尿白蛋白。使用动物无创血压计，采用尾压法(tail-cuff法)测量大鼠收缩压(SBP)及舒张压(DBP)，测量三次取平均值。麻醉大鼠，称量终末体重(W)，测量体长(鼻尖至肛门，L)。计算体重指数:Lee指数=W1/3(g)/L(cm)。于大鼠右心耳取血，分离血清。应用罗氏8000全自动生化分析仪测定空腹血糖、血肌酐、尿素氮、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。大鼠心脏灌注后，迅速分离两侧肾脏。4％多聚甲醛固定左侧肾脏，常规包埋切片后PAS染色，行肾组织形态学检查，采集肾小球、肾小管图像，应用imageJ软件测量两组大鼠肾小球直径。右侧肾脏组织冻存于-80℃冰箱，为蛋白印迹法备用。
研究结果:
1、大鼠一般生理状况和实验室检查结果
Chow组大鼠体型匀称，精神状态良好;HFD组大鼠体型肥胖，活动度和反应较Chow组不同程度降低。喂养满20周，HFD组大鼠体重均值较Chow组高约31％，两组大鼠间体重差异有统计学意义(P＜0.001)并且HFD组大鼠Lee指数大于Chow组(P＜0.05)，证实大鼠肥胖模型造模成功。HFD组大鼠血总胆固醇、甘油三酯较Chow组升高(P均＜0.01);HFD组大鼠24小时尿白蛋白定量高于Chow组(P＜0.05);但两组在血肌酐、尿素氮、血糖、血压方面无统计学差异(P均＞0.05)。
2、大鼠肾脏的病理改变
PAS染色显示，HFD组大鼠的肾皮质、髓质区诱发了明确的肾病。病变以肾小球损害为特征，表现为肾小球肥大，肾小球直径较对照组明显增大(P＜0.01);系膜细胞及系膜外基质增多;近端小管上皮细胞内脂质空泡形成。证实大鼠ORN模型造模成功。
3、大鼠肾脏超声检查结果
(1)灰阶超声:两组大鼠肾脏超声表现为“蚕豆样”，包膜完整，肾皮质回声较正常肝和脾回声低，肾窦呈稍高回声，实质与集合系统分界清晰。灰度分析显示，两组大鼠肾脏实质回声间的差异没有统计学意义(P＞0.05)。HFD组大鼠肾脏体积较Chow组增大(P＜0.05)。进一步分析显示HFD组大鼠肾脏的宽径及厚径增大(P＜0.05，0.01);然而两组大鼠肾脏长径间的差异不显著(P＞0.05)。
(2)彩色多普勒超声:可以观察到两组大鼠的肾动脉主干及呈“树枝状”分布的肾内动脉。可以清晰显示段动脉及叶间动脉的血流灌注情况，但弓形动脉及小叶间动脉显示欠清晰。
(3)频谱多普勒超声:与Chow组大鼠相比，HFD组大鼠肾动脉主干及叶间动脉EDV的流速减低(P均＜0.05)，但PSV之间的差异无统计学意义(P均＞0.05)。HFD组大鼠肾动脉主干及叶间动脉的RI分别高于Chow组，两组间的差异有统计学意义(P均＜0.05)。
4、各超声参数预测ORN的准确性
采用受试者工作特征曲线(ROC)评估各超声参数预测ORN的准确性:采用ROC评估肾宽径的曲线下面积(AUC)为0.758(P＜0.01)，取最佳临界点1.30时，敏感度、特异度、Youden指数分别为62.5％、87.5％、0.50。肾厚径的AUC为0.853(P＜0.01)，取最佳临界点1.26时，敏感度、特异度、Youden指数分别为69.6％、87.0％、0.57。肾动脉主干RI的AUC为0.82(P＜0.01)，取最佳临界点0.55时，敏感度、特异度、Youden指数分别为70.8％、83.3％、0.54。叶间动脉RI的AUC为0.81(P＜0.01)，取最佳临界点0.48时，敏感度、特异度、Youden指数分别91.7％、75.0％、0.67。
研究结论:
1、大鼠ORN模型的主要超声表现:形态学方面为宽径和厚径增加导致的肾脏体积增大，血流动力学方面为舒张期末期流速降低造成的肾动脉阻力指数增高。
2、肾厚径、宽径、肾动脉主干及叶间动脉RI可作为预测ORN的超声参数，对辅助诊断ORN有较高价值。
第二部分:GCN5L1介导的乙酰化修饰在肾脏脂毒性中的作用
研究背景:
脂毒性是ORN重要的发病机制。当线粒体β-氧化能力绝对或相对不足时，脂肪酸在细胞内无法经代谢产生ATP，只能转向酯化。脂质酯化过程的多种中间产物(二脂酰甘油，神经酰胺等)及终产物(甘油三酯、磷脂等)在细胞内积聚进而引发下游一系列致病因子的激活，最终导致细胞功能和结构异常。在此过程中FAO功能的异常是导致脂毒性的关键因素。然而导致FAO受损的上游机制尚不完全清楚。
FAO速率受线粒体代谢酶活性的影响。赖氨酸乙酰化是一种可逆的翻译后修饰，参与多种线粒体代谢酶活性的调节，研究表明营养状态可以影响线粒体代谢酶的乙酰化水平，ORN即是一种营养过剩的病理状态，因此乙酰化修饰可能参与了ORN的病理过程。
GCN5L1是一种新发现的线粒体乙酰转移酶，它被证明可以调节多种线粒体蛋白质乙酰化水平，在线粒体能量代谢调控中发挥重要的作用。GCN5L1是否参与FAO关键酶的乙酰化修饰，其在肾脏脂毒性中的作用尚待研究。
研究目的:
通过研究乙酰化修饰对FAO酶活性的影响，明确高脂对FAO的调控机理，探讨GCN5L1介导的乙酰化修饰在ORN致病机制中的作用。
研究方法:
1、人近端肾小管上皮细胞(HK-2)培养于37℃、含5％CO2的细胞培养箱中，用含10％胎牛血清的DMEM培养。隔天换液，2～3天传代一次。分为PA组(棕榈酸，200μM)、BSA组(牛血清白蛋白，200μM)、GCN5L1小RNA干扰对照+PA/BSA组(CTR+PA/BSA)、GCN5L1小RNA干扰+PA/BSA组(KD+PA/BSA)。动物饲养及造模同第一部分。
2、采用免疫组化检测HFD组和Chow组大鼠肾组织切片中赖氨酸乙酰化水平及GCN5L1的表达;采用免疫印迹法(Western Blot)检测不同刺激后HK-2细胞赖氨酸乙酰化水平、GCN5L1及上皮细胞间充质转化(EMT)相关指标E-cadherin和Vimentin的变化。
3、应用siRNA干扰HK-2细胞，降低肾小管上皮细胞(TECs)中GCN5L1的表达，采用RT-qPCR、Westernblot检测干扰效率。
4、采用免疫沉淀法(IP)测定不同刺激后HK-2细胞内LCAD和β-HAD的乙酰化表达。
5、用试剂盒测定不同刺激后HK-2细胞内脂肪酸β-氧化速率、甘油三酯(TG)含量、ac-CoA含量、LCAD和β-HAD酶活性。
6、油红O染色鉴定不同刺激后TECs中脂质沉积情况。
研究结果:
1、体内、外实验显示高脂环境下TECs内赖氨酸乙酰化的表达增加:免疫组化结果显示，HFD组大鼠肾组织泛乙酰化水平较chow组表达增加，WesternBlot显示PA培养的HK-2细胞，线粒体蛋白泛乙酰化水平较对照组升高(P＜0.01)。
2、PA诱导LCAD和β-HAD发生了高乙酰化，降低了酶活性，降低了FAO速率和ac-CoA含量:IP及WesternBlot显示，PA组线粒体内ac-LCAD和ac-βHAD的表达较BSA组均升高(P＜0.05，0.01)，采用试剂盒检测PA组LCAD和β-HAD酶活性、β-脂肪酸氧化速率及ac-CoA含量均较BSA组降低(P＜0.05，0.05，0.01，0.01)。
3、体内、外实验显示高脂环境下TECs内GCN5L1的表达增加:免疫组化和WesternBlot显示HFD组大鼠TECs内GCN5L1的表达较chow组升高(P＜0.05)，PA组HK-2GCN5L1的表达较BSA组增加(P＜0.05)。
4、siRNA下调GCN5L1的表达:用GCN5L1特异性siRNA处理HK-2后，采用RT-qPCR、WesternBlot检测GCN5L1的干扰效率，数据显示GCN5L1在mRNA水平敲降效率约为70％，在蛋白水平敲降效率约为70％。
5、高脂环境下敲降GCN5L1导致LCAD和β-HAD的去乙酰化和活化，进而增加FAO速率，减少脂质沉积:IP及WesternBlot显示，KD+PA组较CTR+PA组ac-LCAD和ac-βHAD的表达水平降低(P＜0.05，0.05)。试剂盒检测显示KD+PA组较CTR+PA组LCAD和β-HAD酶活性增加(P＜0.05，0.05)，β-脂肪酸氧化速率提高(P＜0.01)，ac-CoA含量增加(P＜0.05)。油红O显示KD+PA组较CTR+PA组脂质沉积减轻。
6、在PA处理的HK-2中下调GCN5L1减轻上皮细胞间充质转化(EMT):WesternBlot显示显示KD+PA组较CTR+PA组E-cad的表达上升(P＜0.05)，Vimentin的表达降低(P＜0.01)。敲降GCN5L1抑制了PA对E-cadherin和Vimentin在HK-2中表达的影响，提示GCN5L1的抑制可以保护TECs免受PA诱导的纤维化。
研究结论:
1、线粒体蛋白乙酰化是调节肾脏FAO的重要机制。
2、抑制GCN5L1表达可以逆转高脂导致的线粒体酶LCAD和β-HAD乙酰化，上调FAO速率，减轻脂毒性。
3、GCN5L1可能成为通过调控脂毒性治疗ORN的潜在靶点。
研究背景:
随着经济的快速发展和人们生活方式的改变，肥胖人口在全球范围内急剧增长，肥胖症的流行导致肥胖相关性肾病(ORN)的发病率逐年增加。尽管该病病情进展缓慢，但仍有约1/3的ORN患者会出现进行性肾功能衰竭，最终发展为终末期肾病(ESRD)。
早期发现与干预对ORN的远期转归具有重要影响，但该病起病隐匿，早期临床症状不典型。目前ORN主要的筛查手段是通过尿常规检测尿蛋白，优点是简单易行，缺点是敏感性不高;肾活检虽然可以明确肾脏的病理损伤，但因其创伤性，大多数患者难以接受。因此，早期诊断ORN具有挑战性，目前临床亟需一种安全、便捷、敏感的检查方法用于ORN的辅助诊断。
超声是一种安全、便捷、无创且成熟的检查手段，可以敏锐地发现肾脏形态及血流灌注的变化，已被广泛用于各种肾脏疾病的诊断。它提供的信息不仅可以用于临床决策，还可以用于治疗方案的选择。肥胖引起的肾脂质异位积聚及肾小球高滤过是导致ORN发病的重要机制，二者可改变肾脏的形态及血流动力学，因此能否通过超声技术检测肾脏形态及血流的变化用于辅助诊断ORN值得深入探究。
研究目的:
采用高脂饮食建立ORN大鼠模型，利用超声技术获取大鼠肾脏二维及血流动力学参数，分析其声像图变化，筛选预测ORN的超声参数，探讨超声在辅助诊断ORN中的价值。
研究方法:
1、动物饲养及造模:4周龄的雄性SD大鼠，20只，适应性喂养两周，随机分为两组:正常饮食组(Chow组，n=8)及高脂饮食组(HFD组，n=12)。Chow组始终给予普通饲料(含10％脂肪)，喂养20周。HFD组高脂饲料(含60％脂肪)喂养8周后，根据体重增长排序，剔除下1/3大鼠，留取上2/3大鼠，继续高脂饲料喂养12周。密切观察大鼠精神，体态等一般情况的变化。
2、超声图像及数据采集:喂养至26周龄，深度麻醉大鼠，背部备皮，取俯卧位行超声检查。采集左肾二维图像，应用imageJ软件分析两组大鼠肾脏实质的回声差异。测量肾脏长径、宽径、厚径。按椭球体积公式计算大鼠左肾体积:V=π/6×长径×宽径×厚径。应用彩色多普勒超声观察肾动脉主干及肾内动脉的走行、分布及充盈状况。频谱多普勒采集肾动脉主干及叶间动脉血流频谱，测量收缩期最大流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、阻力指数(RI)。数值测量三次，取平均值，并记录。所有操作均由同名超声主治医师完成。
3、标本收集及检测:超声检查次日，将大鼠置于代谢笼中，禁食不禁水，收集24小时尿液，记录尿量。应用BA400全自动特定蛋白分析仪测定24小时尿白蛋白。使用动物无创血压计，采用尾压法(tail-cuff法)测量大鼠收缩压(SBP)及舒张压(DBP)，测量三次取平均值。麻醉大鼠，称量终末体重(W)，测量体长(鼻尖至肛门，L)。计算体重指数:Lee指数=W1/3(g)/L(cm)。于大鼠右心耳取血，分离血清。应用罗氏8000全自动生化分析仪测定空腹血糖、血肌酐、尿素氮、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。大鼠心脏灌注后，迅速分离两侧肾脏。4％多聚甲醛固定左侧肾脏，常规包埋切片后PAS染色，行肾组织形态学检查，采集肾小球、肾小管图像，应用imageJ软件测量两组大鼠肾小球直径。右侧肾脏组织冻存于-80℃冰箱，为蛋白印迹法备用。
研究结果:
1、大鼠一般生理状况和实验室检查结果
Chow组大鼠体型匀称，精神状态良好;HFD组大鼠体型肥胖，活动度和反应较Chow组不同程度降低。喂养满20周，HFD组大鼠体重均值较Chow组高约31％，两组大鼠间体重差异有统计学意义(P＜0.001)并且HFD组大鼠Lee指数大于Chow组(P＜0.05)，证实大鼠肥胖模型造模成功。HFD组大鼠血总胆固醇、甘油三酯较Chow组升高(P均＜0.01);HFD组大鼠24小时尿白蛋白定量高于Chow组(P＜0.05);但两组在血肌酐、尿素氮、血糖、血压方面无统计学差异(P均＞0.05)。
2、大鼠肾脏的病理改变
PAS染色显示，HFD组大鼠的肾皮质、髓质区诱发了明确的肾病。病变以肾小球损害为特征，表现为肾小球肥大，肾小球直径较对照组明显增大(P＜0.01);系膜细胞及系膜外基质增多;近端小管上皮细胞内脂质空泡形成。证实大鼠ORN模型造模成功。
3、大鼠肾脏超声检查结果
(1)灰阶超声:两组大鼠肾脏超声表现为“蚕豆样”，包膜完整，肾皮质回声较正常肝和脾回声低，肾窦呈稍高回声，实质与集合系统分界清晰。灰度分析显示，两组大鼠肾脏实质回声间的差异没有统计学意义(P＞0.05)。HFD组大鼠肾脏体积较Chow组增大(P＜0.05)。进一步分析显示HFD组大鼠肾脏的宽径及厚径增大(P＜0.05，0.01);然而两组大鼠肾脏长径间的差异不显著(P＞0.05)。
(2)彩色多普勒超声:可以观察到两组大鼠的肾动脉主干及呈“树枝状”分布的肾内动脉。可以清晰显示段动脉及叶间动脉的血流灌注情况，但弓形动脉及小叶间动脉显示欠清晰。
(3)频谱多普勒超声:与Chow组大鼠相比，HFD组大鼠肾动脉主干及叶间动脉EDV的流速减低(P均＜0.05)，但PSV之间的差异无统计学意义(P均＞0.05)。HFD组大鼠肾动脉主干及叶间动脉的RI分别高于Chow组，两组间的差异有统计学意义(P均＜0.05)。
4、各超声参数预测ORN的准确性
采用受试者工作特征曲线(ROC)评估各超声参数预测ORN的准确性:采用ROC评估肾宽径的曲线下面积(AUC)为0.758(P＜0.01)，取最佳临界点1.30时，敏感度、特异度、Youden指数分别为62.5％、87.5％、0.50。肾厚径的AUC为0.853(P＜0.01)，取最佳临界点1.26时，敏感度、特异度、Youden指数分别为69.6％、87.0％、0.57。肾动脉主干RI的AUC为0.82(P＜0.01)，取最佳临界点0.55时，敏感度、特异度、Youden指数分别为70.8％、83.3％、0.54。叶间动脉RI的AUC为0.81(P＜0.01)，取最佳临界点0.48时，敏感度、特异度、Youden指数分别91.7％、75.0％、0.67。
研究结论:
1、大鼠ORN模型的主要超声表现:形态学方面为宽径和厚径增加导致的肾脏体积增大，血流动力学方面为舒张期末期流速降低造成的肾动脉阻力指数增高。
2、肾厚径、宽径、肾动脉主干及叶间动脉RI可作为预测ORN的超声参数，对辅助诊断ORN有较高价值。
第二部分:GCN5L1介导的乙酰化修饰在肾脏脂毒性中的作用
研究背景:
脂毒性是ORN重要的发病机制。当线粒体β-氧化能力绝对或相对不足时，脂肪酸在细胞内无法经代谢产生ATP，只能转向酯化。脂质酯化过程的多种中间产物(二脂酰甘油，神经酰胺等)及终产物(甘油三酯、磷脂等)在细胞内积聚进而引发下游一系列致病因子的激活，最终导致细胞功能和结构异常。在此过程中FAO功能的异常是导致脂毒性的关键因素。然而导致FAO受损的上游机制尚不完全清楚。
FAO速率受线粒体代谢酶活性的影响。赖氨酸乙酰化是一种可逆的翻译后修饰，参与多种线粒体代谢酶活性的调节，研究表明营养状态可以影响线粒体代谢酶的乙酰化水平，ORN即是一种营养过剩的病理状态，因此乙酰化修饰可能参与了ORN的病理过程。
GCN5L1是一种新发现的线粒体乙酰转移酶，它被证明可以调节多种线粒体蛋白质乙酰化水平，在线粒体能量代谢调控中发挥重要的作用。GCN5L1是否参与FAO关键酶的乙酰化修饰，其在肾脏脂毒性中的作用尚待研究。
研究目的:
通过研究乙酰化修饰对FAO酶活性的影响，明确高脂对FAO的调控机理，探讨GCN5L1介导的乙酰化修饰在ORN致病机制中的作用。
研究方法:
1、人近端肾小管上皮细胞(HK-2)培养于37℃、含5％CO2的细胞培养箱中，用含10％胎牛血清的DMEM培养。隔天换液，2～3天传代一次。分为PA组(棕榈酸，200μM)、BSA组(牛血清白蛋白，200μM)、GCN5L1小RNA干扰对照+PA/BSA组(CTR+PA/BSA)、GCN5L1小RNA干扰+PA/BSA组(KD+PA/BSA)。动物饲养及造模同第一部分。
2、采用免疫组化检测HFD组和Chow组大鼠肾组织切片中赖氨酸乙酰化水平及GCN5L1的表达;采用免疫印迹法(Western Blot)检测不同刺激后HK-2细胞赖氨酸乙酰化水平、GCN5L1及上皮细胞间充质转化(EMT)相关指标E-cadherin和Vimentin的变化。
3、应用siRNA干扰HK-2细胞，降低肾小管上皮细胞(TECs)中GCN5L1的表达，采用RT-qPCR、Westernblot检测干扰效率。
4、采用免疫沉淀法(IP)测定不同刺激后HK-2细胞内LCAD和β-HAD的乙酰化表达。
5、用试剂盒测定不同刺激后HK-2细胞内脂肪酸β-氧化速率、甘油三酯(TG)含量、ac-CoA含量、LCAD和β-HAD酶活性。
6、油红O染色鉴定不同刺激后TECs中脂质沉积情况。
研究结果:
1、体内、外实验显示高脂环境下TECs内赖氨酸乙酰化的表达增加:免疫组化结果显示，HFD组大鼠肾组织泛乙酰化水平较chow组表达增加，WesternBlot显示PA培养的HK-2细胞，线粒体蛋白泛乙酰化水平较对照组升高(P＜0.01)。
2、PA诱导LCAD和β-HAD发生了高乙酰化，降低了酶活性，降低了FAO速率和ac-CoA含量:IP及WesternBlot显示，PA组线粒体内ac-LCAD和ac-βHAD的表达较BSA组均升高(P＜0.05，0.01)，采用试剂盒检测PA组LCAD和β-HAD酶活性、β-脂肪酸氧化速率及ac-CoA含量均较BSA组降低(P＜0.05，0.05，0.01，0.01)。
3、体内、外实验显示高脂环境下TECs内GCN5L1的表达增加:免疫组化和WesternBlot显示HFD组大鼠TECs内GCN5L1的表达较chow组升高(P＜0.05)，PA组HK-2GCN5L1的表达较BSA组增加(P＜0.05)。
4、siRNA下调GCN5L1的表达:用GCN5L1特异性siRNA处理HK-2后，采用RT-qPCR、WesternBlot检测GCN5L1的干扰效率，数据显示GCN5L1在mRNA水平敲降效率约为70％，在蛋白水平敲降效率约为70％。
5、高脂环境下敲降GCN5L1导致LCAD和β-HAD的去乙酰化和活化，进而增加FAO速率，减少脂质沉积:IP及WesternBlot显示，KD+PA组较CTR+PA组ac-LCAD和ac-βHAD的表达水平降低(P＜0.05，0.05)。试剂盒检测显示KD+PA组较CTR+PA组LCAD和β-HAD酶活性增加(P＜0.05，0.05)，β-脂肪酸氧化速率提高(P＜0.01)，ac-CoA含量增加(P＜0.05)。油红O显示KD+PA组较CTR+PA组脂质沉积减轻。
6、在PA处理的HK-2中下调GCN5L1减轻上皮细胞间充质转化(EMT):WesternBlot显示显示KD+PA组较CTR+PA组E-cad的表达上升(P＜0.05)，Vimentin的表达降低(P＜0.01)。敲降GCN5L1抑制了PA对E-cadherin和Vimentin在HK-2中表达的影响，提示GCN5L1的抑制可以保护TECs免受PA诱导的纤维化。
研究结论:
1、线粒体蛋白乙酰化是调节肾脏FAO的重要机制。
2、抑制GCN5L1表达可以逆转高脂导致的线粒体酶LCAD和β-HAD乙酰化，上调FAO速率，减轻脂毒性。
3、GCN5L1可能成为通过调控脂毒性治疗ORN的潜在靶点。