DADS及沉默RhoGDI2增强SGC7901细胞对5-Fu敏感性的研究

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目的:  二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是存在在大蒜中的一种脂溶性物质。RhoGDI2在人胃癌等肿瘤中异常高表达。前期研究发现RhoGDI2高表达可以促进人胃癌细胞的迁移、侵袭及成瘤能力,而DADS可以抑制RhoGDI2的表达。本实验的主要目的是探讨DADS及沉默RhoGDI2对SGC7901细胞凋亡及耐药性的影响,证实DADS与沉默RhoGDI2均可促进SGC7901细胞凋亡,增加对5-FU的敏感性。  方法:  通过脂质体把沉默RhoGDI2质粒转染SGC7901细胞,建立稳转si-RhoGDI2/SGC7901细胞。运用 MTT、流式细胞术检测DADS与沉默RhoGDI2处理SGC7901细胞对细胞凋亡及对5-Fu敏感性的影响。运用免疫荧光、Western blot实验检测DADS与沉默RhoGDI2处理SGC7901细胞对细胞凋亡及耐药相关蛋白的表达。  结果:  1.si-RhoGDI2/SGC7901细胞的构建  将RhoGDI2干扰质粒及阴性对照组质粒分别转染SGC-7901细胞。在荧光显微镜下观察细胞带绿色荧光,用Westernblot检测细胞中RhoGDI2的表达。结果显示RhoGDI2蛋白在沉默RhoGDI2组的表达最低。  2.DADS及沉默RhoGDI2对SGC7901细胞增殖的影响  MTT实验结果显示,5-Fu在1.25、2.5、5、10与20mg·L-1浓度下,SGC7901+DADS和SGC7901/VCR+DADS组抑制率分别为4.3%、11.7%、22.4%、47.8%与60.5%和1.3%、3.5%、7.9%、19.0%与28.1%较SGC7901的2.0%、5.0%、13.5%、20.0%与44.1%和SGC7901/VCR的0.15%、0.5%、0.9%、2.1%与4.4%明显增加(P<0.05)。SGC7901较SGC7901/VCR细胞组抑制率明显增加(P<0.05)。在5-Fu相同浓度下,沉默 RhoGDI2的增殖抑制率2.9%、8.1%、18.2%、35.5%与55.1%较空载体组的2.1%、5.1%、13.7%、20.1%与50.0%明显增加(P<0.05)。Vector/SGC7901组与 SGC7901组差异无统计学意义(P>0.05)。表明DADS与沉默RhoGDI2可抑制SGC7901细胞增殖,一定程度的增加对5-Fu药物的敏感性。  3.DADS及沉默RhoGDI2对SGC7901细胞凋亡的影响  流式细胞学结果显示,SGC7901与SGC7901+DADS凋亡率分别为2.39%和29.00%。具有统计学差异(P<0.05)。SGC7901/VCR和SGC7901/VCR+DADS凋亡率分别为0.68%和18.35%,具有统计学差异(P<0.05)。Vector/SGC7901与沉默RhoGDI2组凋亡率分别为:1.93%和21.95%,具有统计学差异(P<0.05)。提示:DADS和沉默RhoGDI2后,可促进SGC7901细胞凋亡。  4.DADS及沉默RhoGDI2对SGC7901细胞凋亡相关蛋白及耐药相关蛋白表达的影响。  免疫荧光与Western blot结果显示,DADS处理后,SGC7901和SGC7901/VCR细胞组Caspase3表达上调,Bcl-2与P-gp表达下调(P<0.05)。SGC7901较SGC7901/VCR组Caspase3表达高,Bcl-2与P-gp表达低(P<0.05)。沉默RhoGDI2细胞组较SGC7901细胞组Caspase3表达上调,Bcl-2与P-gp表达下调(P<0.05)。Vector/SGC7901组与SGC7901组差异无统计学意义(P>0.05)。提示DADS及沉默RhoGDI2可上调促凋亡蛋白的表达与下调抑制凋亡蛋白和耐药相关蛋白的表达。  结论:  DADS及沉默RhoGDI2可增强SGC7901细胞对5-Fu敏感性。
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