【摘 要】
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目的:研究磁性纳米微粒对中药蛋白质的分离效果、人参蛋白质的双向调节作用,并进一步研究磁性纳米微粒在分离核酸中的应用。方法:1、通过用AEAPS[N-(2-氨乙基)-3-氨基丙基三甲
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目的:研究磁性纳米微粒对中药蛋白质的分离效果、人参蛋白质的双向调节作用,并进一步研究磁性纳米微粒在分离核酸中的应用。方法:1、通过用AEAPS[N-(2-氨乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷]对磁性纳米微粒(magnetic nanoparticle MNP)表面修饰,连接氨基后,利用氨基与蛋白质羧基的反应以及外加磁场力,研究了对几种名贵药材中蛋白质的分离效果。2、应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTr)法及集落形成法,观察了磁性纳米粒子分离的人参蛋白对于人白血病患者骨髓的白血病细胞系细胞(K562)和脐血粒-单祖细胞的影响。3、在磁性微粒表面修饰了oligoDNA,将它作为mRNA的抽提工具,与经典的RNA抽提方法做以比较,并用逆转录--聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关的凋亡基因p16。结果:1、对几种来源不同的生物样品可溶性蛋白的分离结果表明,MNP-NH2对牛血清白蛋(BSA)的分离效果呈现线性相关(r=0.9942,p<0.001);对中草药和其他生物样品中蛋白质的分离具有良好的效果,各实验组数值与对照组比较,具有显著性差异(p<0.001)。2、人参蛋白对白血病细胞集落形成具有抑制作用,与对照组相比有显著性差异(p<0.01);可诱导K562细胞凋亡,且呈现剂量依赖关系(r=0.974)。对粒-单祖细胞有促进生成作用,10μg/ml和20μg/ml浓度组数据与对照组数据经t检验,具有显著性差异(p<0.01)。两低浓度组与两高浓度(40μg/m和80μg/ml)组比,具有非常显著性差异(p<0.001)二者呈现剂量依赖关系。3、实验结果表明:MNP经过修饰oligoDNA后,抽提RNA的效果理想。结论:提示MNP-NH2对于分离生物样品中蛋白质具有广泛的应用前景,人参蛋白质抑制白血病细胞集落形成并诱导其发生凋亡;对粒-单祖细胞有促进生成的作用;MNP经过修饰oligoDNA后抽提RNA的方法,可以替代经典RNA抽提法;MNP巯基后连接端粒酶反义核酸,可被肿瘤细胞(K562)吞噬,并促进其凋亡。
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