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选题依据:抑郁症是一种致病因素多样且严重影响人类身心健康的全球性疾病,在中医理论体系中属于“郁证”的范畴。目前,由于抗抑郁化学药物不良反应日益凸,因此基于中药复方研发抗抑郁新药成为研究热点。课题组近年一直致力于逍遥散抗抑郁作用研究,采用化学成分归属、药代动力学和血清药物化学等方法对逍遥散抗抑郁药效物质基础进行了大量研究,发现君药柴胡和臣药白芍对逍遥散发挥抗抑郁作用的贡献较大[1,2]。中医理论讲,柴胡辛散,疏肝解郁;白芍酸收,养血柔肝,二者散收相合,是解郁疏肝、调畅情志最为基础的药对,是多个抗抑郁名方如《景岳全书》中柴胡疏肝散[3-5]、《伤寒论》中四逆散[6]、《太平惠民和剂局方》中逍遥散[7-9]等的基础药物。研究者在对治疗抑郁症的中药专利复方的用药规律进行分析,结果显示柴胡的使用频数处于第一,白芍的使用频数处于第三位,常用的药对中柴胡-白芍药对居首位[10]。本课题组前期通过LC-MS/MS技术结合背景扣除法已经完成柴胡-白芍药对在逍遥散方中核心地位的化学机制研究[2]。同时,研究表明,柴胡-白芍药对单独使用,亦具有明确的抗抑郁作用[11]。但是柴胡-白芍药对在逍遥散中核心地位的药理机制是如何体现的?柴胡-白芍药对通过什么机制发挥抗抑郁作用?以上问题尚不明确。针对以上问题,本研究采用行为学比较柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组（逍遥散扣除柴胡和白芍）对CUMS抑郁模型大鼠的抗抑郁作用,运用代谢组学技术分析柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组对抑郁相关生物标物调节的异同,并对其所调节的差异标志物进行代谢通路分析,揭示柴胡-白芍药对在逍遥散调节代谢通路方面的贡献,以期阐释药对在复方中发挥核心地位的药理机制。同时,基于代谢组学技术阐明柴胡-白芍药对的抗抑郁作用机制。目的:1、通过比较柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组对CUMS模型大鼠行为学（体重、旷场活动情况、糖水偏爱率和强迫游泳不动时间）的影响,在药效学上评价柴胡-白芍药对对逍遥散抗抑郁作用的贡献。2、联合1H-NMR和LC-MS/MS代谢组学技术,研究柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组对CUMS大鼠血清和肝脏代谢轮廓的的影响,比较分析三种药物对抑郁症相关生物标志物调节的数量和水平,从代谢物调节层面阐明柴胡-白芍药对对逍遥散抗抑郁作用的贡献。3、对柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组调节的抑郁症生物标志物进行代谢通路分析,从代谢通路层面揭示柴胡-白芍药对对逍遥散抗抑郁作用的贡献。内容与方法:1、药效学分析:将大鼠随机分为空白组,模型组,阳性药(盐酸文拉法辛35 mg·kg-1)组,柴胡-白芍药对高低剂量(生药量15、7.5 g·kg-1)组,逍遥散高低剂量(生药量46、23 g·kg-1)组,阴性高低剂量(生药量31、15.5 g·kg-1)组。采用行为学方法,比较柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组对大鼠体重、旷场、糖水偏爱和强迫游泳实验等相关指标的影响。2、代谢组学分析:联合应用1H-NMR和LC-MS/MS技术对不同组大鼠血清和肝脏进行代谢组学分析。采用主成分分析（Principal component analysis,PCA）结合偏最小二乘判别分析（Orthogonal signal correction filtered partial least squares discrimi-nation analysis,OPLS-DA）和V-S-plot图,筛选出抑郁相关生物标志物,并分析柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组对生物标志物调节数量和水平的异同。3、代谢通路分析:在筛选出抑郁症相关生物标志物的基础上,对柴胡-白芍药对、逍遥散和阴性组调节的生物标志物进行代谢通路分析,比较三种药物对代谢通路调节的异同。结果:1、药效学结果:与空白组相比,模型组大鼠体重、穿越格数和直立次数、糖水偏爱率均显著下降（P<0.001）,强迫游泳不动时间明显延长（P<0.01）,表明抑郁症模型造模成功。体重实验中,各给药组均显著性增加大鼠体重,且组间无显著性差异。旷场实验中,与模型组相比各给药组均能调节大鼠空间活动情况,高剂量组逍遥散对大鼠穿越格数调节效果比柴胡-白芍药对稍强,低剂量组两者相当,组间无显著性差异;低剂量组阴性与逍遥散出现显著性差异。糖水偏爱实验中,高剂量组药对和逍遥散回调相当,低剂量组逍遥散回调稍强,组间无显著性差异;强迫游泳实验中,柴胡-白芍药对组不动时间短于逍遥散和阴性组。2、血清代谢组学结果:在基于1H-NMR和LC-MS/MS技术的血清代谢轮廓分析中,空白组与模型组在PCA及OPLS-DA图中均明显分开,表明模型组大鼠的血清代谢轮廓相比于空白组产生显著性改变。通过V-S-plot共筛选出35种抑郁症相关生物标志物。其中,逍遥散、柴胡-白芍药对和阴性组分别显著回调其中的22、17和13种,药对与逍遥散调节数量和水平上相近。3、血清代谢通路分析:对抑郁相关生物标志物进行通路分析,共筛选出15条代谢通路（影响值（29）0.1视为抑郁症相关代谢通路）。对的重要代谢通路调节上,柴胡-白芍药对和逍遥散调节的代谢通路的重要性和显著性更为相近。4、肝脏代谢组学结果:在基于1H-NMR和LC-MS/MS技术的肝脏代谢轮廓分析中,空白组与模型组在PCA及OPLS-DA图中均明显分开,表明模型组大鼠的肝脏代谢轮廓相比于空白组产生显著性改变。通过V-S-plot共筛选出28种抑郁症相关生物标志物。其中,逍遥散、柴胡-白芍药对和阴性组均能显著回调其中的25、24和14种,逍遥散与药对组调节数量和水平上相当。5、肝脏代谢通路分析:对抑郁相关生物标志物进行通路分析,共筛选出10条代谢通路。对总代谢通路调节数量上,柴胡-白芍药对和逍遥散能显著调节其中的9条,阴性对照能显著调节其中的6条;三种药物共同调节的重要代谢通路上,柴胡-白芍药对和逍遥散调节代谢通路的重要性和显著性更为相近。结论:本研究从行为学、代谢物和代谢通路3个层面揭示柴胡-白芍药对对逍遥散发挥抗抑郁的贡献。行为学层面,柴胡-白芍药对在多数指标上表现出与逍遥散相近的抗抑郁效果;代谢物层面,柴胡-白芍药对对标志物调节数量和水平上更接近于逍遥散;代谢通路层面,柴胡-白芍药对在总代谢通路调节数量、代谢通路的重要性和显著性水平上与逍遥散更为相近。