目的:全球癌症范围中,乳腺癌是女性发病率最高的癌症,其死亡率占女性癌症死亡率第二位。治疗乳腺癌的方法主要是一些传统方法包括手术切除、放化疗。近几年来,癌症的靶向治疗方法应用也越来越广泛。然而,即便患者接受了治疗,也可能会因为乳腺癌细胞自身的转移能力以及部分具有较强干性的癌细胞而导致患者再次患病。目前有研究已经证明MED27作为癌基因,能够调控黑色素瘤细胞的生长增值,提高其侵袭迁移能力,促进黑色素瘤的发展。同时,还有文献报道在肾上腺皮质癌中,MED27同样能够促进癌细胞的增值,抑制其凋亡,癌细胞的侵袭和迁移能力具有显著影响。本实验中,我们已经证明了MED27在乳腺癌中高表达且调控乳腺癌的发生发展,随后通过RNA-seq技术寻找到MED27下游的靶基因KLF4,且MED27调控KLF4的表达。有研究证明KLF4能够维持乳腺癌的干性,促进乳腺癌的的转移和侵袭,但MED27如何调控KLF4表达继而影响乳腺癌生长的分子机制及其临床意义尚不清楚。本项目在乳腺癌细胞和动物模型中敲低或过表达MED27,研究其对KLF4表达的调控以及对乳腺癌生长的影响,揭示MED27/KLF4信号通路在乳腺癌发生发展中的作用和分子机制;并利用组织芯片,结合临床资料,分析乳腺癌患者组织中MED27/KLF4的表达水平及二者的相关性,评估其与乳腺癌生长、复发、预后的关系,确定其临床意义,为确立MED27/KLF4信号通路作为新型的乳腺癌治疗靶点提供理论和实验依据。方法:(1)通过一些癌症相关数据库,例如Oncomine,TCGA,GEO数据库,以及免疫印迹等方法分析MED27在正常乳腺细胞及乳腺癌中的表达量。(2)选取两种三阴性乳腺癌细胞系做敲低MED27的处理,同时在两种非三阴性乳腺癌细胞系中过表达MED27,通过细胞活性检测实验(MTT)、划痕实验、克隆形成实验、侵袭实验等细胞表型实验研究其在乳腺癌进展中的生物学作用。(3)通过一代成球试验检测MED27对乳腺癌干性的影响。(4)利用MTT实验检测敲低或过表达MED27后,乳腺癌细胞对化疗药物耐受性的影响。(5)建立裸鼠的乳腺癌肺转移模型,在体内研究MED27对乳腺癌转移能力的影响。(6)应用RNA-seq技术,分析MED27下游结合的靶基因。(7)应用PCR实验与免疫印迹实验检测MED27和KLF4的表达量的关系,并通过CHIP实验分析MED27是否结合到KLF4的启动子区域。结果:(1)MED27在乳腺癌细胞及组织中表达水平较正常组织和细胞高,而且在三阴性乳腺癌细胞系中的表达量要高于非三阴细胞系。(2)敲低MED27可以下调乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,干性;过表达MED27可以增强癌细胞的增值能力,促进乳腺癌细胞的迁移、侵袭和干性。(3)敲低MED27后,乳腺癌细胞对表柔比星的耐受能力减弱,过表达MED27后增强了乳腺癌对表柔比星的耐受能力。(4)裸鼠肺转移模型显示,敲低MED27减弱了乳腺癌在体内的转移能力。(5)KLF4能够维持乳腺癌的干性,促进乳腺癌的转移,且MED27的表达水平和KLF4的表达水平呈正相关。(6)MED27和KLF4可协同调控乳腺癌的发展。结论:MED27作为癌基因,能够促进乳腺癌细胞的增值,提高其转移和侵袭的能力,同时能够维持乳腺癌细胞的干性进而提高了对化疗药物的耐受性。通过实验分析得出MED27能够调控KLF4的转录,并且能够协同KLF4来实现对乳腺癌发展过程的调控。通过实验结果猜测MED27/KLF4通路能够为乳腺癌治疗提供新的治疗方案。