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盐酸表阿霉素(EPI)是一种广谱抗生素,为同类药物的首选,单一用药对多种肿瘤有抑制作用。目前临床使用的不足之处多为药物释放快、目标组织药物浓度低,静脉给药后分布体内各种组织器官,不良反应明显。针对盐酸表阿霉素临床应用的不足,制备盐酸表阿霉素靶向纳米制剂。本研究以叶酸偶联牛血清白蛋白为(FA-BSANPs)载体,首先采用乳化去溶剂法制备牛血清白蛋白纳米粒(BSANPs),然后利用吸附法实现对表阿霉素的包载,制备出叶酸介导的盐酸表阿霉素白蛋白纳米粒(FA-EPI-BSANPs),目的是制备出对癌细胞具有主动靶向性的EPI纳米靶向制剂,同时提高EPI生物利用度和降低毒副作用。针对上述情况本实验结合纳米技术,研究制备了 FA-EPI-BSANPs纳米粒,并考察制备过程中吸附时间、FA-BSANPs浓度、转速、pH值、交联度及FA-BSANPs/EPI的质量比等对FA-EPI-BSANPs纳米粒粒径、包封率和载药量的影响;并对纳米粒进行了初步的评价,运用微观检测手段激光粒度分析仪测定FA-EPI-BSANPs的粒径大小、粒径分布及Zeta电位,扫描电镜观察纳米颗粒的表面形态,高效液相色谱法分析白蛋白负载盐酸表阿霉素纳米制剂的包封率、载药量和释药性能;用傅利叶变换红外光谱、X射线衍射、差示扫描热量法、热重分析考察纳米粒的结构;用MTT实验和细胞靶向性实验考察FA-EPI-BSANPs对肝癌细胞SMMC 7721的抑瘤效果。旨在为临床提供一种新的高效低毒盐酸表阿霉素抗肿瘤化疗药物制剂。本实验研究得出:1.紫外分光光度法进行全波长扫描测定叶酸和白蛋白的偶联量,测定结果为:白蛋白摩尔数/偶联叶酸摩尔数=1:2.65。2.通过单因素方法考察制备条件对FA-EPI-BSANPs纳米粒的粒径、包封率和载药量的影响:得出pH值对FA-EPI-BSANPs纳米粒的包封率、载药量有重要的影响。当pH=4至8时,EPI和BSA带有异种电荷,根据库伦定律:F=KQ1*Q2/R2,据此判断pH为4-8时,BSA和EPI之间吸引力较强。FA-EPI-BSANPs纳米粒的包封率和载药量均随着吸附时间增加而增加,在20 min时接近饱和8 h后保持稳定,BSANPs对EPI的吸附一个快速的吸附过程。随着转速的增加,载药量先逐渐上升后逐渐降低,在转速为1750 r/min时,载药量达到最高为18.25%;包封率逐渐上升转速为1750 r/min时达到最高,此后保持稳定。3.制备FA-EPI-BSANPs的最佳实验条件:反应时间为8h、FA-BSANPs溶液浓度为3.5:mg/ml、转速为1750(r/min)、pH值为6.0、交联度为30%和FA-BSANPs/EPI的质量比为2.6。激光粒度仪和高效液相法测定最佳条件下FA-EPI-BSANPs的平均粒径为145.4±0.5 nm、包封率和载药量分别达到98.93%和23.41%、电位为-30.84±0.43 mV。4.FA-EPI-BSANPs的表征:用扫描电子显微镜检测BSA、EPI和FA-EPI-BSANPs形态,EPI为颗粒状晶体、形状不规则,BSA不规则薄片形的晶体,FA-EPI-BSANP为球形颗粒,大小相近,分散较为均匀。傅利叶变换红外光谱、X射线衍射、差示扫描热量法和的热重分析法检测结果得出成功制备了FA-EPI-BSANPs纳米粒,EPI在FA-EPI-BSANPs纳米粒中无定型形式存在,其中大部分EPI被包裹在纳米粒内部,少部分吸附在纳米粒表面。5.EPI原药组和FA-EPI-BSANPs纳米粒组相比,FA-EPI-BSANPs纳米粒的释放分为两相,在最初的24 h内药物传递系统出现突释现象,之后缓慢释放至112 h,分别释放出所含EPI的42.6%和82.1%,因此本文制备的药物释放曲线具有缓释性质。6.FA-EPI-BSANPs稳定实验:通过不同温度和时间考察FA-EPI-BSANPs纳米粒的粒径变化。结果显示FA-EPI-BSANPs纳米粒在不同温度和时间时,粒径无明显变化,在FA-EPI-BSANPs冻干粉复溶后8h内,没有结晶析出现象,因此本文制备的FA-EPI-BSANPs性质稳定,具有良好实践性。7.MTT法测定抑制率,结果表明FA-EPI-BSANPs能提高EPI对SMMC-7721攻击能力,并提高了对细胞的致死作用,在EPI浓度相同条件下FA-EPI-BSANPs和EPI的抑制率分别为 84.5%和 59.2%。FA-EPI-BSANPs 和 EPI 的 IC50值分别为 11.5 μ g/ml 和 18.8 μg/ml,为进一步探索该纳米粒在体内的靶向性、活性和代谢规律提供了前期实验基础。8.利用FITC荧光修饰纳米粒测定FA-EPI-BSANPs对SMMC-7721细胞的靶向性。结果显示,相同条件下SMMC-7721细胞对不同纳米粒摄取量以FA-EPI-BSANP最高、荧光强度最强。并且不同浓度FA-EPI-BSANPs对SMMC-7721定向攻击能力呈现浓度依赖性。结果证明:通过叶酸受体介导可以显著提肝癌细胞SMMC-7721对FA-EPI-BSANPs的吞噬能力,能明显提高EPI对SMMC 7721的定向攻击能力。以上结果证明,本实验成功制备了粒径达到纳米级别、大小相近、分布均匀,具有靶向性的FA-EPI-BSANPs纳米粒。并且FA-EPI-BSANPs形状规整,与EPI原药组相比抗癌活性明显提高,为白蛋白负载EPI纳米靶向载药系统在体内活性和代谢的进一步研究提供实验基础。