电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞EGFR及其ERK信号转导机制的影响

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目的:以中医经络学说中经脉-脏腑相关理论为指导,观察电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜损伤的修复效应、大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和c-myc表达的影响,从器官、细胞、分子水平多层次系统地探讨“足阳明经与胃相关”的物质基础以及电针足阳明经(穴)参与胃黏膜损伤修复的信号转导途径。方法:采用水浸束缚应激法(WRS)制作应激性大鼠胃黏膜损伤模型,以电针足阳明经“足三里”、“梁门”、“四白”穴为施治因素,按Guth等标准记录大鼠胃黏膜损伤指数,光镜下观察胃黏膜组织形态学变化;采用免疫组化和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测胃黏膜细胞EGFR蛋白和基因的表达;免疫组化和免疫印迹法(Western blot)检测胃黏膜细胞ERK磷酸化水平;RT-PCR法检测胃黏膜细胞c-myc基因的表达。结果:①经造模后,模型组大鼠胃黏膜损伤指数最高,正常组大鼠胃黏膜损伤指数最低,两组间差异有非常显著性意义(p<0.01),说明造模是成功的;电针胃经组和电针胆经组大鼠胃黏膜损伤指数均明显降低,与模型组比较有非常显著性差异(P<0.01),其中电针胃经组大鼠胃黏膜损伤指数降低最为明显,与电针胆经组比较有非常显著性差异(P<0.01);②在电针足阳明经(穴)后提取的不同稀释度血清对大鼠胃黏膜细胞EGFR表达差异影响中,1/10胃经血清组大鼠胃黏膜细胞EGFR表达与1/2、1/5和1/20胃经血清组比较均有非常显著性差异(P<0.01),大鼠胃黏膜细胞EGFR表达强弱依次为:1/10胃经血清组>1/20胃经血清组>1/5胃经血清组>1/2胃经血清组;③在与电针足阳明经(穴)或足少阳经(穴)提取的血清孵育后,胃经组和胆经组大鼠胃黏膜细胞EGFR及其基因的表达均明显增强,与正常组、模型组比较均有非常显著性差异(P<0.01);其中胃经组大鼠胃黏膜细胞EGFR及其基因的表达又最为明显,与胆经组比较有显著性差异(P<0.05);④在与电针足阳明经(穴)或电针足少阳经(穴)提取的血清孵育后,胃经组和胆经组大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化、c-myc基因表达均明显升高,与正常组、模型组比较均有非常显著性差异(P<0.01);胃经组大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化、c-myc基因表达升高最为明显,与胆经组比较均有非常显著性差异(P<0.01);当用PD153035阻断EGFR后,胃经+PD153035组大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化、c-myc基因表达均明显降低,与胃经组比较均有非常显著性差异(P<0.01)。结论:①电针足阳明经(穴)可促进大鼠胃黏膜损伤的修复,足阳明经与胃具有相对的特异性联系;②电针足阳明经(穴)后提取的不同稀释度血清皆能使大鼠胃黏膜细胞EGFR蛋白的表达增强,但存在一定的浓度效应相关性,1/10稀释度血清的效应最为明显;③电针足阳明经(穴)后提取的血清可提高大鼠胃黏膜细胞EGFR及其基因的表达,EGFR是足阳明经与胃相关的重要物质基础;④电针足阳明经(穴)后提取的血清可提高大鼠胃黏膜细胞ERK磷酸化和c-myc基因表达水平,并且上述效应可随EGFR被阻断而减弱,EGFR是电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤修复的调节位点,ERK和c-myc是足阳明经与胃相关的重要物质基础;⑤电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤修复的细胞信号转导可能是通过激活EGFR及其ERK信号转导途径而实现的;⑥利用针刺穴位后所提取的血清与离体器官、组织、细胞相互作用,以探讨针刺效应及其作用机制,值得做进一步更深入的研究。
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