基于基因融合介导滚环扩增的BCR/ABLp210超灵敏分型新方法

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BCR/ABLp210融合基因是慢性粒细胞白血病(CML)的特征分子标志物,它包含e13a2和e14a2两种转录亚型,虽然这两种转录亚型之间只有75个碱基的不同,但其导致的病人病理特征和对靶向药物的应答均存在差异。目前国内外实验室对这两种转录亚型的鉴别还缺乏简单、快速的检测方法。本课题提出RNA融合触发滚环扩增(RF-RCA)策略,直接扩增RNA提取物,对e13a2和e14a2两种转录亚型进行区分,能够一步辨别e14a2与e13a2两种融合亚型。在本方案中,哑铃模板及特异性引物与靶融合RNA同时结合,可诱导特异性引物与哑铃型模板的邻位杂交,触发RCA产生大量串联重复G-四联体序列,在硫黄素T和G-四联体相互作用下实现实时荧光输出。该研究策略敏感性高、特异性强,可检测到低至0.1aM的靶融合基因,也可直接从复杂的基因组RNA提取物中识别0.01%的e13a2和0.1%的e14a2转录亚型。此外,我们成功地将RF-RCA技术应用于临床样本BCR/ABLp210亚型的分析中,对患者进行精确地分子分型并可监测伊马替尼治疗效果。本课题所建立的RF-RCA策略可快速、简便鉴别BCR/ABLp210融合亚型,为临床研究和CML的个体化治疗提供了一个超灵敏、准确、实用的检测工具。
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