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黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)是由曲霉菌属产生的具有毒性作用的次生代谢产物。AF对人体健康具有急性、慢性、致癌性、免疫抑制等多种毒性危害作用,自然条件下产生的AF主要包括B1、B2、G1、G2 4种,且这4种毒素残留对人体健康的毒性往往具有协同和加性效应,实施黄曲霉毒素总量(total aflatoxins,TAFs)(B1+B2+G1+G2)检测已成为当前食品质量安全检测领域发展的必然趋势。比较各种TAFs检测方法,GICA技术具有快速、简便、特异性强、稳定性好、可现场检测、筛检样品量大等优势,是实现TAFs检测的主要技术手段。本研究的目是建立TAFs免疫试纸检测方法,为食品TAFs快速检测提供可靠的技术支撑。本研究工作的主要内容与结论如下:1.根据AF的分子结构和活性位点,设计出4种B族AF和3种G族AF抗原制备方法,通过UV、SDS-PAGE和动物免疫对抗原进行鉴定。结果表明,OAE法是B族AF抗原合成的最佳方法,AFB1与BSA的分子结合比为8.46∶1,动物免疫所产生AFB1pAb具有高效价(免疫动物易产生抗体)、敏感(IC50为17.03μg/kg)、特异(100%识别AFB1)、广谱(同时100%识别AFB2)等特性;SA法是G族AF抗原合成的最佳方法,AFG1与BSA的分子结合比为4.32∶1,动物免疫所产生AFG1 pAb同样具有高效价(免疫动物易产生抗体)、敏感(IC50为13.6μg/kg)、特异(100%识别AFG1)、广谱(与AFG2的交叉反应率为82.19%)等特性。3.分别用AFB1-BSA(OAE)和AFG1-BSA(SA)免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术筛选AFB1 mAb和AFG1 mAb细胞株,体内诱生腹水法制备AFB1 mAb和AFG1 mAb,并对其免疫学特性进行分析。结果表明,筛选出AFB1 mAb细胞株4株,其中2A11最好,经9次传代分泌抗体稳定,细胞培养上清抗体效价1∶(1.28×103),腹水抗体效价为1∶(5.12×105),Ka为1.05×109 L/moL,IC50为6.22μg/kg,可100%识别AFB1,与AFB2、AFG1和AFG2交叉反应率(cross-reactivity,CR)分别为82.31%、50.11%和12.48%,制备出了效价高、敏感性好、特异性强AFB1 mAb;筛选出AFG1 mAb细胞株2株,其中3F10最好,经6次传代分泌抗体稳定,细胞培养上清抗体效价1∶(1.28×104),腹水抗体效价为1∶(5.12×105),Ka为1.36×1010L/moL,IC50为5.04μg/kg,可100%识别AFG1,与AFG2的CR%为85.81%,与AFB1、AFB2无CR,制备出了效价高、敏感性好、特异性强AFG1 mAb,研究结果为AFs免疫试纸检测方法的建立奠定了抗体基础。4.根据胶体金免疫层析技术原理,建立了TAFs免疫试纸(TAFs-Strip)检测方法,TAFs-Strip具有快速(10 min)、灵敏(4μg/L)、特异(只与AF反应,与其他化合物无CR)、广谱(可同时检测AFB1、B2、G1、G2)、简便(不需要任何仪器与附加试剂)的优点,符合国内外TAFs检测限量标准,具有广阔的市场前景和应用价值。