【摘 要】
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我们用基因工程表达的人CTLA-4蛋白作为免疫原,采用细胞融合、ELISA法和免疫印迹等方法制备并筛选到了鼠抗人CTLA-4的单克隆抗体,并以两种方法测定了抗人CTLA-4抗体对淋巴细
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我们用基因工程表达的人CTLA-4蛋白作为免疫原,采用细胞融合、ELISA法和免疫印迹等方法制备并筛选到了鼠抗人CTLA-4的单克隆抗体,并以两种方法测定了抗人CTLA-4抗体对淋巴细胞增殖的影响,以及利用抗体的结合特性观察了淋巴细胞表达CTLA-4的情况.结果发现我们得到了4株单克隆抗体（1H7、2G2,2F11,3A7）,它们均可与近似天然构象的人CTLA-4Ig融合蛋白结合,又可与大肠杆菌表达出的经复性后的人CTLA-4蛋白结合,并且可分别识别人CTLA-4Ig融合蛋白不同抗原决定簇.其中一株（3A7）既和近似天然构象的蛋白结合又可与变性的蛋白结合,并具有显著阻断CTLA-4的抑制性免疫信号传递,促进混合淋巴细胞及经ConA刺激后淋巴细胞的进一步活化、增殖的功能.此外,荧光标记的抗体结合实验结果发现单抗3A7不仅可以和人的CTLA-4蛋白结合,还可和小鼠的CTLA-4蛋白结合,而且小鼠的腺脏淋巴细胞体外在ConA刺激培养后,第三、四天CTLA-4表达量较高,第二天次之,第一天较少.而小鼠的脾脏淋巴细胞体外在ConA刺激培养72hr后,活化的淋巴细胞在细胞膜上及胞质中有强烈的绿色荧光存在,而在没有激活的淋巴细胞中,强烈的荧光只存在于细胞胞质中.因此,小鼠的脾脏淋巴细胞体外在ConA的刺激下,CTLA-4的表达量在刺激后的第三天达到高峰,且在胞质及包膜上存在着CTLA-4蛋白,而在不经刺激的脾脏淋巴细胞中,CTLA-4没有表达于膜上,只存在于细胞质中.
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