玉米除草活性肽的分离纯化研究

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本文为进一步从玉米蛋白粉中分离出其他的具有更高生根抑制活性的单一活性肽化合物,以及为后续研究活性肽的除草机理工作做准备。以食品级玉米蛋白粉为原料,采用碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)酶解制备了玉米除草活性肽,并利用多年生黑麦草(Lolium perenne L)种子为检测材料,测定玉米除草活性肽的IC<,50>为1.5mg/mL。然后采用了离子交换层析对除草活性肽进行了粗分,经收集得到了十三个组分。设置各组分蛋白浓度为0.5mg/mL,经测定IEC-Al组分的抑制率达91.05%,明显高于其他各组分。将IEC-Al组分用凝胶层析进行第二次分离得到了GFC-A2为高活性组分,其蛋白浓度为0.25mg/mL时抑制率为84.36%。再将该组分经制备型高效液相(Prep-HPLC)分离收集得到一疏水性较强的高活性组分Prep-HPLC-6,蛋白浓度为0.2mg/mL时抑制率为89.55%。Prep-HPLC-6组分最后经反相高效液相分离,根据峰的保留时间收集十三个峰组分,并确定HPLC-6组分纯度较高且活性最强。直接测定其抑制率为100%。 利用液相色谱-电喷雾串联质谱联用技术(HPLC-ESI-MS/MS)对HPLC-6组分进行了序列分析得出其中含有7条肽。并在线计算了其等电点。
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