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研究背景和目的假肥大型肌营养不良是一种由编码抗肌萎缩蛋白（dystrophy）基因突变所致的X-连锁隐性遗传性肌病，根据遗传方式、发病年龄、萎缩肌肉的分布、有无肌肉假性肥大、病程及预后等，分为Duchenne肌营养不良（Duchennemuscular dystrophy, DMD）和Becker肌营养不良（Becker muscular dystrophy,BMD）。DMD/BMD临床上以进行性加重的对称性肌无力、肌萎缩，血清肌酸激酶水平增高，腓肠肌假性肥大为主要特征，一般为男孩发病，DMD较常见，两者在活产男性新生婴儿中的发病率分别为1/3500和1/12000，无地理或种族间明显差异。DMD病情进展快，程度重，90%患儿双侧腓肠肌假性肥大，多在25～30岁以前死于呼吸道感染、心力衰竭或消耗性疾病，最重的是散发病例，预后不良。BMD比DMD少见，具有DMD必有的特征，与DMD不同点是发病年龄较晚，病情进展慢，多不伴有心肌受累或仅轻度受累，预后较好。DMD基因位点位于Xp21.2上，在基因组序列跨越2200kb。DMD基因庞大，突变发生率高，突变类型复杂多样，包括单个或多个外显子缺失，基因片段重复，单个碱基互换、缺失或插入，内含子微重排以及5’-3’UTR改变等，且病情严重程度不一，临床与基因变异的关系尚不明确。“阅读框架学说”认为如果突变破坏基因阅读框，则产生截短且无功能的dystrophy蛋白，导致发病早、症状重的DMD；若突变未破坏阅读框，产生的蛋白则可能有部分功能，导致BMD，在已收录的突变数据库中，约91%的突变与表型间的关系符合这一规则。但仍有部分患儿临床表型与基因型不相符。因此，本文总结分析临床诊断为DMD和BMD的患儿的临床表现，利用多重链接探针依赖扩增（Multiplex Ligation probe amplification, MLPA）技术和全基因组捕获-新一代测序（next-generation sequencing, NGS）技术分析患儿致病基因突变类型，以及断裂点具体位置和片段大小，为进一步明确DMD/BMD发病机制，分析临床表型与基因型关联程度提供理论依据，对制定DMD/BMD诊断策略，同时为临床判断DMD/BMD的预后判断及产前诊断提供遗传学帮助。方法（1）选择2011年06月至2012年5月来我院就诊的以肌酸激酶水平异常、进行性肌无力和运动功能倒退为主诉的患儿为对象，根据发病年龄、Gower’s征阳性、腓肠肌假性肥大、血清肌酸激酶水平升高等指标临床诊断为DMD或BMD。（2）对临床诊断为DMD/BMD的28例患儿应用多重链接探针依赖扩增（Multiplex Ligation-Dependent ProbeAmplification，MLPA）技术进行DMD基因外显子突变筛查。（3）随机选择MLPA阳性结果的5例和和所有阴性结果的患儿采用DMD全基因捕获-新一代测序（next-generation sequencing technology，NGS）进行全基因突变检测。（4）选择检测结果为DMD基因缺失突变和点突变的患儿采用聚合酶连扩增及直接测序法验证。结果（1）根据患儿发病年龄、Gower’s征阳性、腓肠肌假性肥大、血清肌酸激酶水平升高等指标临床诊断为DMD患儿24例，BMD患儿4例。（2）通过MLPA技术检测发现DMD基因外显子突变22例，其中外显子缺失突变16例，重复突变4例，同时合并缺失和重复突变2例，检出率78%，6例检测结果阴性。（3）选择MLPA检测阳性结果的5例和阴性结果的6例共11例应用全基因捕获-NGS技术检测，发现3例外显子缺失突变（编号18：exon51deL，chrX:31779857-31795289；编号19：exon53deL，chrX:31685440-31747548；编号20：exon51-55deL，chrX:31632504-31827732），和2例外显子重复突变（编号21：exon45dup，chrX:31970766-32023816；编号22：exon55dup，chrX:31540860-31649750），与MLPA结果一致，且精确定位了断裂点区域和片段大小，另5例为点突变，包括单个碱基的缺失、插入或互换。1例检测结果阴性。（4）选择MLPA检测为外显子缺失的2例和NGS检测为点突变的5例共7例，根据DMD基因序列，利用Primer primer5.0软件设计PCR扩增引物，经PCR扩增和Sanger测序验证，所得结果与MLPA和NGS检测结果一致。（5）28例患儿中，除1例未检测到致病基因突变外，有25例DMD/BMD患儿临床表型与基因型关系符合“阅读框架学说”，符合率为92.6%。结论（1） DMD基因突变类型多样，本研究中包括单个或多个外显子缺失和/或重复突变，单个碱基互换、缺失或插入突变等。（2） MLPA技术能有效检出DMD基因外显子缺失和/或重复突变以及复杂杂合突变；单个外显子缺失或峰面积比值偏低的外显子，需结合PCR及测序验证，可以使结果更为精确。（3）全基因捕获-NGS技术不仅能检出DMD基因缺失和/或重复突变，还能准确检出微小缺失和点突变，并精确定位断裂点位置及片段大小，为进一步分析基因型与临床表型的关系提供理论依据。NGS技术有望成为检测DMD/BMD的主流技术，并为临床DMD/BMD的早期诊断、预后判断提供遗传学帮助。（4）本研究有92.6%的患儿临床表型与基因型相符，随着对DMD基因突变类型的深入探讨以及全基因捕获-新一代测序技术的发展，DMD/BMD患儿临床表型与基因型的关系将进一步阐明。（5）根据本研究，建议DMD/BMD遗传学诊断策略为：1.根据X连锁遗传、腓肠肌肥大、近端肢体无力、血清CK增高，或肌电图和肌肉病理呈肌病表现，建立临床诊断；2.应用MLPA技术初步建立分子诊断；3.如需进行产前诊断，及MLPA未发现突变时，进行DMD全基因分析，确立最终诊断；4.根据最终遗传学诊断进行预后判断和遗传咨询。