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目的从人乳腺癌细胞株中分选获得CD44+/CD24-乳腺癌细胞亚群,检测分选所得乳腺癌细胞亚群自我更新能力及多向分化潜能,初步鉴定其干细胞活性;测定分选所得CD44+/CD24-乳腺癌干细胞亚群耐药性及多药耐药相关蛋白及基因表达水平,探讨其与乳腺癌多药耐药的关系,为进一步展开相关研究提供思路。方法常规培养人乳腺癌细胞株MCF-7,低浓度化疗药物持续诱导法诱导建立乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR。MACS免疫磁珠法分选获得CD44+/CD24-乳腺癌细胞亚群,微球体试验及体外动物实验鉴定分选所得细胞亚群自我更新能力及多向分化潜能;MTT法测定分选所得CD44+/CD24-乳腺癌细胞亚群对化疗药物的敏感性,Real Time PCR及流式细胞术分别测定多药耐药相关基因MDR1及多药耐药相关蛋白P-gp表达水平,激光共聚焦显微镜测定化疗药物作用后胞内药物蓄积水平。结果(1)经低浓度化疗药物持续诱导,所得MCF-7/ADR细胞株可在1ug/ml阿霉素培养基下稳定生存。(2)MCF-7/ADR细胞株与MCF-7细胞株中CD44+/CD24-细胞比例分别为6.36±0.57%,1.50±0.10%,差异具有统计学意义,P<0.05。(3)MACS免疫磁珠法分选可获得纯度约为93.85%的CD44+/CD24-乳腺癌细胞亚群。(4)微球体试验发现,分选所得CD44+/CD24-乳腺癌细胞亚群具有更强的成球能力。体外动物实验发现,分选所得CD44+/CD24-乳腺癌细胞亚群具有更强的体外成瘤能力。(5)阿霉素对MCF-7/ADR细胞株和CD44+/CD24-细胞亚群的半数杀伤浓度(IC50)分别为15.84±0.66mg和17.37±0.46mg,二者之间差异具有统计学意义,P<0.05;CD44+/CD24-细胞亚群MDR1基因表达水平为MCF-7/ADR细胞株的1.07±0.02倍,差异具有统计学意义,P<0.05;MCF-7/ADR细胞株和CD44+/CD24-细胞亚群P-gp表达强度分别为(101177.10±2171.86)、(114906.70±2560.19),差异有统计学意义,P<0.05;CD44+/CD24-细胞亚群较MCF-7/ADR细胞株,胞内蓄积阿霉素更少,分别为518.67±11.93和 571.67±11.15,差异有统计学意义,P<0.05。结论(1)乳腺癌干细胞具有更强的耐药能力,低浓度化疗药物持续化疗可在一定程度上富集乳腺癌干细胞。(2)MACS免疫磁珠法分选CD44+/CD24-乳腺癌干细胞可行,可获得纯度高于90%的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的乳腺癌干细胞。(3)乳腺癌干细胞对化疗药物有更高的抵抗性,表达更高水平耐药相关基因MDR1及耐药相关蛋白P-gp,对化疗药物的外排作用更强,可能是乳腺癌化疗失败的关键因素之一,P-gp蛋白介导的药物外排可能是主要的作用机制。