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目的以提高甲氨蝶呤（Methotrexate,MTX）检测灵敏度和特异性为目标,构建一种基于高吸附材料十八烷基三甲基溴化铵（stearyltrimethylammoniumbromide,STAB）的电化学检测新方法。为进一步提升MTX检测的特异性,制备新型选择性识别材料—磁性分子印迹聚合物（Magnetic molecularly imprinted polymers,MMIPs）,将该识别材料作为前处理材料,实现患者血浆中MTX的高效吸附、选择性识别及快速磁性分离,简化样品前处理过程、降低血浆中蛋白等成分对MTX检测的干扰,将该前处理方法与高效液相色谱方法联用,为MTX药物浓度的临床检测和监测提供新的方法支持。方法1.以STAB修饰乙炔黑糊电极（Acetylene black paste electrode,ABPE）,构建STAB/ABPE电化学传感器。采用循环伏安法（Cyclic voltammetry,CV）和电化学阻抗法（Electrochemical impedance spectroscopy,EIS）对该传感器进行表征。随后,利用CV对影响传感器性能的几个因素进行优化,并判断传感器的选择性、重复性和稳定性是否达到要求。最后,在最优条件下将该传感器用于临床样本中MTX含量的检测,并与高效液相色谱-紫外检测法（High-performance liquid chromatograph-ultraviolet detection,HPLC-UV）的检测结果进行比较。2.使用水热法合成Fe3O4纳米颗粒（Nanoparticles,NPs）,随后用正硅酸乙酯（Tetraethyl orthosilicate,TEOS）对Fe3O4NPs进行包硅修饰制备Fe3O4@SiO2。以Fe3O4@SiO2作为反应基底,MTX作为模板分子,选择3-氨丙基三乙氧基硅烷[（3-aminopropyl）triethoxysilane,APTES]作为功能单体,TEOS作为交联剂,采用溶胶-凝胶法制备对MTX选择性吸附的MMIPs。通过透射电镜分析（Transmission electron microscope,TEM）、傅里叶红外光谱分析（Fourier transform-infrared spectrometer,FT-IR）、X射线衍射分析（X-ray diffractometer,XRD）和X射线能谱分析（X-ray photoelectron spectrometer,XPS）对材料进行表征,采用静态、动态、选择性吸附实验评价MMIPs对MTX的吸附性能。3.系统优化萃取条件,以0.02 mg/m L MTX-甲醇溶液为上样溶液、以MMIPs为吸附剂、对淋洗液和洗脱液的组成成分及比例进行优化,建立用于血浆样本中MTX检测的磁性固相萃取（Magnetic Solid-Phase Extraction,MSPE）方法,将其与HPLC-UV联用实现临床样本中MTX血药浓度的快速检测。结果1.以STAB修饰ABPE可以显著提高传感器对MTX的吸附和催化性能,STAB与乙炔黑（Acetylene black,AB）的协同作用显著增加了电极的比表面积和导电性。在最优条件下,所制备的传感器在MTX血药浓度检测中表现良好,方法具有较好的线性范围（0.005μM-7.0μM）和检出限（3.07 n M,S/N=3）,且具有良好的稳定性和重复性。此外,所制备的传感器受干扰物质的影响较小,具有较好的选择性。最后,将该传感器用于实际血浆样品中MTX的检测,加标回收率为4.38%-7.58%,其检测结果与标准方法HPLC-UV结果具有较好的一致性。2.实现了Fe3O4NPs的成功合成,通过在Fe3O4NPs的表面包被SiO2,获得Fe3O4@SiO2,终产物MMIPs则采用了分子印迹的技术制备。TEM、FT-IR谱图、XPS谱图和XRD谱图等表征结果表明MMIPs已被成功制备。静态吸附曲线显示MMIPs对MTX的吸附量为39.56 mg/g,印迹因子为9.40,吸附平衡时间为60 min。另外,该材料对MTX结构类似物的吸附能力较差,表明其对MTX吸附有较好的抗干扰能力和选择性。3.在最优的MSPE条件下,即萃取剂MMIPs的使用量为100 mg,上样时间选择120 min,淋洗液为水-甲醇（8:2,v/v）、洗脱液为甲醇-乙酸（4:1,v/v）,洗脱时间选择60 min时,该方法中MTX在0.00005-0.25 mg/m L范围内呈线性,检出限为12.51 ng/m L,本实验建立的MSPE-HPLC-UV方法检测MTX的准确性较好,与药物浓度分析仪检测结果较一致。结论本研究成功制备了基于STAB增敏的新型MTX电化学传感器,提高了MTX检测的灵敏度;在此基础上制备了一种新型的MTX吸附材料—MMIPs,建立了基于磁性分子印迹固相萃取技术的高效液相检测方法,为MTX血药浓度的选择性测定提供了新思路。经验证两种方法均可实现MTX血药浓度的直接检测,为MTX药物浓度的检测和监测提供了新的方法支撑。