论文部分内容阅读
目的:康复新液是由蜚蠊科美洲大蠊干燥虫体的乙醇提取液精制、纯化而成的动物中成药,临床上用于治疗胃溃疡疗效确切,但机制不明。本研究拟初步探讨康复新液抗实验性胃溃疡的作用机制,为其临床应用提供依据。方法:1.康复新液按20ml/kg、10ml/kg、5ml/kg剂量给药7d后,采用束缚浸冷水的方法建立大鼠急性胃溃疡模型。肉眼观察和HE染色观察康复新液对急性胃溃疡大鼠胃黏膜形态学影响;免疫组化方法测定胃组织中三叶因子2(TFF2)和碱性成纤维生长因子(bFGF)的表达;Elisa法测定血清中5-羟色胺(5-HT)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)表达水平;Western blot测定胃组织中凋亡相关蛋白表达水平。2.采用乙酸烧灼法建立大鼠慢性胃溃疡模型,康复新液按20ml/kg、10ml/kg、5ml/kg剂量给药14d后,肉眼观察和HE染色测定康复新液对慢性胃溃疡大鼠胃黏膜形态学影响;免疫组化方法测定胃组织中TFF2和bFGF表达;试剂盒测定血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;Elisa法测定胃组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和前列腺素E2(PGE2)的表达量。3.体外培养胃黏膜上皮细胞,采用非甾体抗炎药制备胃黏膜上皮细胞损伤模型,MTT法测定不同浓度康复新液对其增殖的影响;观察康复新液对其形态变化影响,Hoechst/PI染色检测凋亡发生情况;Western blot测定细胞中Erk1/2、p-Erk1/2及凋亡相关蛋白表达水平。结果:1.急性胃溃疡模型大鼠胃黏膜可见大面积溃疡点,病理检测显示胃黏膜缺损的溃疡样变化;免疫组化结果显示造模给药后胃组织中TFF2和bFGF含量增加;Western blot结果显示模型组大鼠胃组织中Bcl-2蛋白含量降低,Bax和Caspase-3蛋白含量增加。与模型组比较,康复新液各剂量组大鼠血清中5-HT、TNF-α含量显著降低(P<0.05),GAS、MTL含量有升高趋势;各给药组Bcl-2蛋白表达升高,Bax和Caspase-3蛋白表达降低。2.慢性胃溃疡模型大鼠胃黏膜肉眼可见病变样溃疡面,病理检测显示胃黏膜有缺损;免疫组化结果显示与空白组相比较,模型组和给药组胃组织中TFF2和bFGF蛋白阳性表达增加,其中康复新液各剂量组有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,康复新液各剂量组大鼠血清中MDA含量明显降低(P<0.05),NO、T-SOD含量呈升高趋势;胃组织中EGF含量显著降低(P<0.05),VEGF、PGE2含量均升高,且康复新液低剂量组VEGF含量显著升高(P<0.05)。3.MTT结果显示,稀释10倍以上的康复新液对GES-1作用24h以内对细胞生长无抑制作用,当作用时间延长至72h时,浓度过高或过低的康复新液均会对细胞的生长有一定的抑制作用。稀释80倍、作用24h康复新液对非甾体抗炎药造成的GES-1细胞损伤有一定的修复作用,Hoechst/PI染色后经高内涵细胞分析系统观察,可见康复新液能一定程度减轻非甾体抗炎药引起的细胞损伤,减少凋亡细胞和死细胞数量。Western blot结果显示,与空白组相比较,经非甾体抗炎药处理后的GES-1细胞中p-Erk1/2与Erk1/2蛋白含量比值显著增加(P<0.01);与非甾体抗炎药组相比较,非甾体抗炎药+康复新液组和非甾体抗炎药+康复新液+U0126组p-Erk1/2与Erk1/2蛋白含量比值增加,但非甾体抗炎药+康复新液+U0126组比值增加程度不及非甾体抗炎药+康复新液组。与空白组相比较,非甾体抗炎药组Bcl-2和Bax含量比值降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与非甾体抗炎药组相比较,康复新液组和非甾体抗炎药+康复新液组上述比值均升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1.康复新液对急慢性胃溃疡均有治疗作用,可减轻胃黏膜损伤和促进黏膜修复。2.康复新液对于急性胃溃疡的作用主要与调节胃肠激素水平、调节急性胃溃疡模型黏膜防御因子和损伤因子之间的平衡以及抗胃黏膜细胞凋亡有关;而对慢性胃溃疡,其作用机制主要跟抗氧化损伤和促进受损黏膜修复有关。3.康复新液能抑制非甾体抗炎药引起的人胃黏膜上皮细胞损伤,其作用机制可能与激活Erk1/2信号通路从而减轻非甾体抗炎药引起的GES-1凋亡有关。